【摘要】：前言 巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV)是導(dǎo)致垂直傳播最常見的病原體,新生兒CMV感染可累及多個器官,從而表現(xiàn)出癥狀的多樣性。目前CMV感染新生兒的致病性研究多集中在母嬰傳播途徑和臨床治療等方面,而對不同基因型CMV的致病性差異方面的研究較少。本實(shí)驗(yàn)以111例CMV感染患兒尿中CMV為模板,應(yīng)用巢式PCR擴(kuò)增CMV gB基因片段后,應(yīng)用限制性內(nèi)切酶Rsa Ⅰ和Hinf Ⅰ,酶切分型。對引起新生兒感染CMV gB基因型進(jìn)行分析,研究不同gB基因型CMV致病性的差異。 方法 1.擴(kuò)增模板制備:具有臨床資料的111例CMV感染新生兒尿樣本中提取CMV DNA。 2.目的基因片段擴(kuò)增:采用巢式PCR擴(kuò)增CMV gB基因片段。外側(cè)引物應(yīng)用文獻(xiàn)所應(yīng)用的引物。5’引物1:5’-GTTCCGAAGC-CGAAGACTCG;5’引物2:5’-GCAGCACCTGGCTCTATCG;5’引物3:5’-GCCAGCTCACCTTCTGG,3’引物:3’-GCACCTTGACGCTGGTTTGG。內(nèi)側(cè)引物引自文獻(xiàn):5’-TGGAACTCGAACGTTTGGC 3’-GAAACGCGCG-GCAATCG。(引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成)。PCR擴(kuò)增體系為50μl。反應(yīng)程序如下:95℃預(yù)變性4min后開始循環(huán),95℃變性1min,55℃退火4.5sec,72℃延伸45sec,共35個循環(huán),最終72℃延伸5min。2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。 3.限制性內(nèi)切酶酶切:將擴(kuò)增的CMV gB基因片段分別用限制性內(nèi)切酶Rsa Ⅰ(購自promega公司)和Hinf Ⅰ(購自大連寶生物)酶切,3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定分型。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:分析引起新生兒感染的CMV gB基因型,以及新生兒感
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R722.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2667171