【摘要】： 目的擬通過建立正常中國兒童CSF蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜,篩選表皮葡萄球菌腦膜炎(Staphylococcus epidermidis meningitis,SeM)特異性蛋白質(zhì),為SeM的早期診斷提供線索,同時(shí)也為進(jìn)一步治療提供參考。 方法收集SeM患兒和同年齡正常兒童CSF各4ml,三氯乙酸(trichloracetic acid,TCA)沉淀法獲取CSF總蛋白質(zhì),固相pH梯度(immobile pH gradient,IPG)二維聚丙烯酰胺凝膠電泳(2-DE)技術(shù)分離蛋白質(zhì),染色后,對(duì)凝膠進(jìn)行掃描獲取圖像,利用圖像分析軟件進(jìn)行比較分析,尋找兩組患兒CSF蛋白質(zhì)譜的異常變化斑點(diǎn)。篩選出5個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn),切取后進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-assisted laser desorption/ionization time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,獲得肽質(zhì)量指紋圖譜(Peptide mass fingerprinting,PMF),運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)獲取蛋白的基本信息,確定差異蛋白質(zhì)。 結(jié)果正常兒童CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)438個(gè),SeM患兒CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)425個(gè),其中發(fā)現(xiàn)有25個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在正常CSF表達(dá),在SeM CSF中表達(dá)而在正常CSF中無表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)為12個(gè);與正常CSF蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量比較,SeM有6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2倍以上上調(diào),而19個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2倍以上下調(diào)。共選出5個(gè)差異比較明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析,獲得了5張肽質(zhì)量指紋圖譜。軟件識(shí)別其有效肽片斷峰后查詢數(shù)據(jù)庫,搜索后匹配到蛋白質(zhì)的點(diǎn)有5個(gè)。發(fā)現(xiàn)高親和力的谷氨酸運(yùn)載體和α2-HS糖蛋白僅在SeM CSF中表達(dá),HP蛋白在SeM CSF中表達(dá)量上調(diào),載脂蛋白E和激肽釋放酶6在SeM CSF中表達(dá)量下調(diào)。可能成為SeM的特異性蛋白質(zhì)分子。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功建立了正常兒童和SeM患兒CSF的雙向凝膠電泳圖譜。通過凝膠圖像分析和計(jì)算機(jī)信息處理,兩者比較發(fā)現(xiàn)有蛋白質(zhì)點(diǎn)存在著量或質(zhì)的差別。其中高親和力的谷氨酸運(yùn)載體、α2-HS糖蛋白、HP蛋白、載脂蛋白E和激肽釋放酶6可能與SeM發(fā)生發(fā)展相關(guān),為早期診斷及尋找新的藥物靶點(diǎn)提供了新的思路。
【圖文】：

質(zhì)譜使用基質(zhì)峰和胰蛋白酶自動(dòng)降解離子峰作為內(nèi)對(duì)照進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)校正。每個(gè)蛋白樣品分別測(cè)定3次的質(zhì)譜峰，，采用 Dataexpforer軟件分析，顯示的質(zhì)譜峰界面如圖2一2所示。Voya口 .rSP一e口1[BP一刀印么24么拓]22刃若二1引e1姍曰習(xí)工洽廷.側(cè)‘一筍癱1日加田悶Z乙7刁湘圖2一 2MALD工一TOF一S膚質(zhì)量指紋圖譜(X軸為m/z;Y軸為相對(duì)強(qiáng)度2.2.6.3生物信息學(xué)通過 MascotDistiller軟件掃描質(zhì)譜峰的高度和坐標(biāo)值，將上述數(shù)據(jù)輸入Mascot數(shù)據(jù)庫中搜索(~matrixscienc已com)，檢索時(shí)各主要參數(shù)設(shè)置(表

中南大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章結(jié)果第三章結(jié)果3.1seM組esF圖譜與正常組CsF圖譜比較正常組與seM組CSFZ一DE圖譜見圖3一1、圖3一2。選擇圖3一t作為參考膠，將圖3一2與其進(jìn)行匹配。結(jié)果測(cè)得正常兒童CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)438個(gè)，seM患兒CSF分離獲得蛋白質(zhì)斑點(diǎn)425個(gè)，其中發(fā)現(xiàn)有25個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)僅在正常CSF表達(dá)(圖3一3)，在SeMCSF中表達(dá)而在正常CSF中無表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)為12個(gè)(圖3一4);與正常CSF蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量比較，而19個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2倍以上下調(diào)(圖3一5)，SeM有6個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)表達(dá)量有2倍以上上調(diào)(圖3一6)。以下所分析的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)均為SeM與正常對(duì)照組CSF比較的結(jié)果。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R725.1

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4 張雷;王s

本文編號(hào)：2614554