【摘要】：研究背景及目的支氣管哮喘(Bronchial asthma)簡稱哮喘,是最常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病之一,是由多種細胞及細胞組分共同參與形成的慢性氣道炎癥性疾病。調查顯示,與其他各年齡階段相比,兒童哮喘的患病率最高。哮喘的發(fā)病機制一直是研究的熱點,主要集中在氣道炎癥機制、免疫因素、遺傳因素、神經調節(jié)機制等,但具體發(fā)病機制至今仍未完全清楚。目前哮喘的治療是以吸入糖皮質激素和β2受體激動劑為主的綜合治療,多數(shù)哮喘患兒可達到臨床控制,但仍有部分哮喘患兒治療效果欠佳。長期應用糖皮質激素可能會出現(xiàn)不同程度的副作用,長期應用β2受體激動劑,致使哮喘的臨床癥狀、治療失敗率明顯增高。哮喘對兒童的身體及心理健康均存在嚴重危害。因此,積極探尋哮喘發(fā)生的分子機制并進行靶向治療,尋找有效且副作用小的新方法來治療哮喘,是不斷完善哮喘治療手段的重要一環(huán)。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR),是細胞內外信號網絡中的一個重要調控因子,在多種因素的活化下參與調節(jié)體內基因的轉錄和翻譯、蛋白質的合成以及能量的代謝等,是調控真核生物細胞生長、增殖和分化的樞紐分子。由mTOR構成的信號通路功能失調,與炎癥損傷、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等密切相關。研究顯示,mTOR和以其為中心構成的相關信號通路在哮喘鼠模型中可參與肺組織炎性浸潤和氣道重塑等病理過程而介導哮喘的發(fā)生。缺氧誘導因子-1α(hypoxia indueible factor-1 alpha,HIF-1α),是一種氧依賴性的轉錄激活因子,在免疫和炎癥反應中扮演著重要角色,尤其是過敏性氣道炎癥反應。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),主要受HIF-1α的調節(jié),是促進血管生成最有效的細胞因子之一,在血管生成以及組織重塑過程中占據(jù)中心作用。研究發(fā)現(xiàn),哮喘動物模型中HIF-1α蛋白表達增加,通過促進VEGF的轉錄,使血管生成增加,參與哮喘氣道重塑等。既往多項研究證明mTOR和HIF-1α及VEGF之間存在緊密聯(lián)系,mTOR可以調控HIF-1α的轉錄合成,使HIF-1α進入細胞核后誘導VEGF的表達增加,由此推斷,mTOR可能與HIF-1α及VEGF協(xié)同參與哮喘的發(fā)病過程。目前mTOR、HIF-1α和VEGF的聯(lián)合檢測在哮喘患兒中未見相關研究,為此,本研究通過臨床測定哮喘患兒外周血中這三個因子的水平,同時分析三個因子在哮喘中的關聯(lián)性,以探討mTOR、HIF-1α和VEGF三因子在哮喘發(fā)生中的作用意義。材料和方法1研究對象本實驗的研究對象取自從2015年01月至2016年04月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院兒內科門診就診以及在呼吸科住院治療的34例哮喘發(fā)作期患兒作為哮喘發(fā)作組,31例支氣管肺炎患兒作為肺炎組。同期選取在該院兒童保健門診行健康檢查的31例健康兒童,定義為對照組。在年齡和性別構成方面3組入組兒童之間均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。該項研究符合我院醫(yī)學倫理委員會的要求,在得到其批準和征得各組患兒家長知情并同意的情況下實行。2標本采集哮喘發(fā)作組、肺炎組及對照組所有兒童均在就診的24h內抽取空腹靜脈血3ml,離心靜脈血標本,收集上層血清,并置-80℃冰箱內保存,用于檢測其中細胞因子的水平。3實驗方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各組患兒外周血中mTOR、HIF-1α和VEGF的水平。4統(tǒng)計學方法對實驗中所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析均應用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行,并以均數(shù)±標準差(sx±)表示各組計量資料的結果。對多組樣本均數(shù)進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗,不符合方差齊性檢驗時對數(shù)據(jù)進行對數(shù)轉換,兩者均符合后對多組樣本均數(shù)應用單因素方差分析進行比較;采用LSD-t檢驗對組間數(shù)據(jù)進行兩兩比較;采用Pearson直線相關分析對三變量之間的相關性進行分析,以α=0.05作為差異有無統(tǒng)計學意義的檢驗標準。結果1.mTOR水平:哮喘發(fā)作組患兒外周血中mTOR水平顯著高于肺炎組和對照組(P0.01);而肺炎組和對照組mTOR水平無顯著差別(P0.05)。2.HIF-1α水平:哮喘發(fā)作組患兒外周血中HIF-1α水平顯著高于肺炎組和對照組(P0.01);肺炎組和對照組HIF-1α水平相比無顯著差別(P0.05)。3.VEGF水平:哮喘發(fā)作組患兒外周血中VEGF的水平顯著高于肺炎組和對照組(P0.01);肺炎組和對照組VEGF水平相比無顯著差別(P0.05)。4.相關性分析:哮喘發(fā)作組患兒外周血中mTOR、HIF-1α和VEGF水平之間互相呈正相關關系:其中mTOR水平和HIF-1α水平呈正相關關系,相關系數(shù)r=0.919,P0.01;mTOR水平和VEGF水平呈正相關關系,相關系數(shù)r=0.906,P0.01;HIF-1α水平和VEGF水平呈正相關關系,相關系數(shù):r=0.925,P0.01。肺炎組和對照組患兒外周血中mTOR、HIF-1α和VEGF水平之間不具有相關性(P0.05)。結論1.mTOR、HIF-1α和VEGF參與了哮喘的發(fā)病。2.mTOR、HIF-1α和VEGF三者在哮喘的發(fā)病機制中可能存在協(xié)同作用。
【圖文】：

附表與附圖表 4.1 各組患兒外周血中 mTOR、HIF-1α 和 VEGF 水平（x ±s）組 別 n mTOR（pg/mL） HIF-1α（pg/mL） VEGF（pg/mL喘發(fā)作組 34 91.02±10.94 70.76±15.61 517.38±83.72肺炎組 31 35.54±4.78a26.65±6.77a260.85±38.16對照組 31 33.87±4.41a25.11±7.10a243.51±39.13F 值 622.851 165.443 232.182P 值 <0.01 <0.01 <0.01a與哮喘發(fā)作組比較，P <0.01。

10圖4.2 哮喘發(fā)作組患兒外周血中mTOR水平 圖4.3 哮喘發(fā)作組患兒外周血中mTOR與 HIF-1α 水平相關分析圖 水平與 VEGF 水平相關分析圖（r=0.919, P<0.01） （r=0.906, P<0.01）圖 4.4 哮喘發(fā)作組患兒外周血中 HIF-1α 水平與 VEGF 水平相關分析圖（r=0.925, P<0.01）
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R725.6

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