【摘要】：目的通過檢測全反式維甲酸(All-Trans RetinoicAcid,ATRA)干預(yù)的缺氧性大鼠腎小管上皮細(xì)胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)抗增殖蛋白-1(Prohibitin1,PHB1)、抗增殖蛋白-2(Prohibitin2,PHB2)表達(dá)水平,初步探討ATRA對缺氧性RTEC的PHB1和PHB2表達(dá)的影響。 方法實驗細(xì)胞選用大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞株NRK-52E細(xì)胞,購自上海生物細(xì)胞庫,培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞選用混有胎牛血清和雙抗的高糖培養(yǎng)基(即在100ml高糖培養(yǎng)基中加入5ml胎牛血清和1ml雙抗),然后置于37℃,5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。傳代3次后,分為3組,正常組、模型組、ATRA干預(yù)組。正常組細(xì)胞不做任何處理,模型組細(xì)胞置于真空罐中,負(fù)壓吸引器吸盡殘余空氣,充入缺氧氣體(95%N2和5%CO2)密封建立缺氧性RTEC損傷模型,ATRA干預(yù)組細(xì)胞中加入0.1μmol/L的ATRA后參照模型組的方法進(jìn)行缺氧處理。采用實時熒光定量PCR法測定正常組、模型組、ATRA干預(yù)組缺氧24h、36h兩個時間點(diǎn)NRK-52E細(xì)胞PHB1、 PHB2、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin,a-SMA)的mRNA表達(dá)量,采用Western blot法檢測3組NRK-52E細(xì)胞的PHB1、PHB2、TGF-β1、α-SMA的蛋白表達(dá)量。 結(jié)果1.與正常組比較,模型組、ATRA干預(yù)組2個時間點(diǎn)NRK-52E細(xì)胞PHB1和PHB2的mRNA表達(dá)量及其蛋白表達(dá)量均顯著下降(P0.05),缺氧36h細(xì)胞的表達(dá)量較缺氧24h細(xì)胞的表達(dá)量下降更為顯著；與模型組比較,ATRA干預(yù)組24h及36h NRK-52E細(xì)胞PHB1和PHB2的mRNA表達(dá)量及其蛋白表達(dá)量均顯著增高(P0.05)。2.與正常組比較,模型組、ATRA干預(yù)組2個時間點(diǎn)NRK-52E細(xì)胞TGF-β1、α-SMA的mRNA表達(dá)量及其蛋白表達(dá)量均顯著增高(P0.05),缺氧36h細(xì)胞的表達(dá)量較缺氧24h細(xì)胞的表達(dá)量增高更為顯著；與模型組比較,ATRA干預(yù)組2個時間點(diǎn)NRK-52E細(xì)胞TGF-β1、α-SMA的mRNA表達(dá)量及其蛋白表達(dá)量均顯著下降(P0.05)。3.相關(guān)性分析：模型組NRK-52E細(xì)胞PHB1、PHB2的蛋白表達(dá)量與TGF-β1及a-SMA的蛋白表達(dá)量均呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05)。 結(jié)論在缺氧性RTEC損傷模型中,ATRA可顯著增強(qiáng)RTEC中PHB1和PHB2蛋白表達(dá)量及其mRNA表達(dá)量,可能對缺氧性RTEC損傷具有保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R726.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2568161