【摘要】：第一章(第一節(jié))青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸可溶性瘦素受體慢病毒載體的構(gòu)建目的：構(gòu)建青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(adolescent idiopathic scoliosis, AIS)的可溶性瘦素受體(soluble leptin receptor, sOB-R)基因過表達(dá)的慢病毒載體,進(jìn)而為探索與sOB-R功能異常有關(guān)的蛋白酶及分子機(jī)制提供理論與物質(zhì)基礎(chǔ)。方法：設(shè)計(jì)sOB-R基因的序列,酶切相應(yīng)片段及pHBLV-CMVIE-IRES-Puro載體,亞克隆構(gòu)建sOB-R/pHBLV-CMVIE-IRES-Puro重組質(zhì)粒,經(jīng)抗性篩選及測序鑒定后獲得陽性表達(dá)的重組質(zhì)粒,隨后sOB-R/pHBLV-CMVIE-IRES-Puro經(jīng)線性化后與pSPAX2, pMD2G共同轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,進(jìn)行慢病毒包裝,隨后進(jìn)行鑒定及滴度測定。結(jié)果：酶切及測序鑒定證實(shí)sOB-R基因準(zhǔn)確插入穿梭質(zhì)粒pHBLV-CMVIE-IRES-Puro中,慢病毒免疫熒光鑒定證實(shí)sOB-R基因過表達(dá)的慢病毒模型包裝成功,滴度測定結(jié)果滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)論：成功構(gòu)建出sOB-R基因過表達(dá)的慢病毒載體,為后續(xù)探索sOB-R基因功能異常相關(guān)的蛋白酶及分子機(jī)制提供了基礎(chǔ)。第二章(第一節(jié))術(shù)中三維導(dǎo)航系統(tǒng)在脊柱側(cè)彎手術(shù)中的學(xué)習(xí)曲線研究目的：探討O臂機(jī)(O-arm)聯(lián)合三維導(dǎo)航系統(tǒng)下胸椎椎弓根螺釘內(nèi)固定治療青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(adolescent idiopathic scoliosis, AIS)的學(xué)習(xí)曲線。方法：回顧性分析我院同一手術(shù)組自2013年9月至2014年8月收治的行O-arm導(dǎo)航下后路椎弓根螺釘內(nèi)固定的44例AIS患者的臨床資料,所有患者術(shù)前、術(shù)后均行CT檢查,男18例,女26例,年齡9-18歲,平均13.4歲。按置釘先后順序分成1-5組,每組67枚螺釘。根據(jù)術(shù)后CT測量螺釘尖距椎弓根內(nèi)側(cè)壁、外側(cè)壁及椎體前緣的距離,并對(duì)置釘精確性進(jìn)行組間比較。結(jié)果：本組研究共納入335枚椎弓根螺釘,總體精確性為93.2%(312/335)。共有23枚不良置釘(6.8%),其中組1有13枚(19.4%),組2有4枚(5.9%),組3有2枚(3.0%),組4有3枚(4.5%),組5有1枚(1.5%),組2、3、4和5的破壁率顯著低于組1,差異具有顯著性(P0.05),而組2、3、4和5之間差異無顯著性(P0.05)。5組均無高危置釘及螺釘相關(guān)并發(fā)癥。結(jié)論：O-arm導(dǎo)航系統(tǒng)顯著提高了在青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸手術(shù)中置釘?shù)木_性。這項(xiàng)技術(shù)的學(xué)習(xí)曲線大約需67枚置釘?shù)慕?jīng)驗(yàn)積累,即可達(dá)到較熟練程度。第二章(第二節(jié))術(shù)中三維導(dǎo)航系統(tǒng)在Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病手術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值目的：探討O臂機(jī)(O-arm)聯(lián)合三維導(dǎo)航系統(tǒng)在提高Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病(neurofibromatosis type 1, NF-1)伴脊柱側(cè)凸患者椎弓根置釘精確性方面的應(yīng)用價(jià)值。方法：回顧性分析2007年6月至2014年2月于我院行脊柱側(cè)彎矯形手術(shù)并有完整臨床及影像學(xué)資料的32例NF-1伴脊柱側(cè)凸患者。根據(jù)置釘方式分為兩組：G1組(O-arm導(dǎo)航下置釘)包括13例患者,男性5例,女性8例,平均年齡14.8歲；G2組(徒手置釘)包括19例患者,男性9例,女性10例,平均年齡15.3歲。G1組患者術(shù)前側(cè)凸Cobb角及胸椎后凸角分別為70.3±6.7°和18.4±9.3°,G2組患者術(shù)前側(cè)凸Cobb角及胸椎后凸角分別為62.2±8.7°和16.6±9.0°,兩組之間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。兩組共置入213枚螺釘于頂椎區(qū)(包含頂椎在內(nèi)的上下各三個(gè)節(jié)段)。根據(jù)術(shù)后CT,不良置釘被分為四級(jí)；0級(jí)(理想置釘),1級(jí)(破壁2 mm),2級(jí)(破壁2-4 mm),3級(jí)(破壁4 mm)。結(jié)果：32名患者中總破壁率為27.7%(59/213)。其中G1組破壁率20.7%(19/92)明顯低于G2組33.0%(40/121)(p0.05)。兩組中最易破壁處均為椎弓根外側(cè)壁,其中G1組15.2%(14/92),G2組16.5%(20/121)。結(jié)論：兩種椎弓根螺釘置釘技術(shù)容易發(fā)生破壁的位置均為椎弓根外側(cè)壁。較傳統(tǒng)徒手置釘技術(shù)而言,應(yīng)用O-arm導(dǎo)航技術(shù)指導(dǎo)NF-1伴脊柱側(cè)凸頂椎椎弓根置釘能夠明顯提高精確性。第二章(第三節(jié))術(shù)中三維導(dǎo)航系統(tǒng)在青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸手術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值目的：探討O臂機(jī)(O-arm)聯(lián)合三維導(dǎo)航系統(tǒng)在重度青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(adolescent idiopathic scoliosis, AIS)患者后路矯形手術(shù)中的應(yīng)用。方法：我科自2012年9月引進(jìn)O-arm三維導(dǎo)航系統(tǒng)并應(yīng)用于重度AIS后路矯形手術(shù)中。對(duì)21例重度AIS患者在O-arm三維導(dǎo)航系統(tǒng)引導(dǎo)下完成頂椎區(qū)椎弓根螺釘?shù)闹萌?同時(shí)對(duì)42例經(jīng)徒手置釘?shù)闹囟華IS患者進(jìn)行回顧性分析,通過術(shù)后CT比較兩組患者的頂椎區(qū)置釘精確性差異。結(jié)果：O-arm組21例AIS患者頂椎區(qū)共置入156枚螺釘,其中優(yōu)142枚(91.0%),良14枚(9.0%),差0枚(0%),優(yōu)良率為100%。徒手組42例對(duì)應(yīng)節(jié)段共置入230枚螺釘,其中優(yōu)182枚(79.1%),良30枚(13.1%),差18枚(7.8%),優(yōu)良率為92.2%。O-arm組與徒手組凹側(cè)破壁率均顯著高于凸側(cè)破壁率(O-arm組：15.2% vs.4.4%,P=0.019；徒手組：26.9% vs.15.9%,P=0.012)。O-arm組內(nèi)側(cè)破壁率顯著低于徒手組(2.6% vs.5.2%,P=0.038)。此外,O-arm組椎弓根螺釘?shù)钠票诼逝c置釘節(jié)段和參考架之間的距離無明顯相關(guān)性。結(jié)論：在O-arm導(dǎo)航系統(tǒng)引導(dǎo)下行重度AIS后路矯形手術(shù)頂椎區(qū)椎弓根螺釘置釘可取得極佳的優(yōu)良率。與傳統(tǒng)徒手置釘技術(shù)相比,該技術(shù)顯著提高了頂椎區(qū)置釘?shù)木_性與安全性。此外,應(yīng)用O-arm聯(lián)合三維導(dǎo)航系統(tǒng)具有輻射計(jì)量低,操作簡單等優(yōu)勢,因此具有良好的應(yīng)用前景。第二章(第四節(jié))術(shù)中三維導(dǎo)航系統(tǒng)在預(yù)防術(shù)后胸腔積液方面的應(yīng)用價(jià)值目的：探討O臂機(jī)(O-arm)聯(lián)合三維導(dǎo)航系統(tǒng)是否會(huì)降低青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(adolescent idiopathic scoliosis, AIS)患者術(shù)后胸腔積液量。方法：回顧性分析我院同一手術(shù)組自2012年8月至2013年5月收治的行O-arm導(dǎo)航下后路椎弓根螺釘內(nèi)固定的15例AIS患者的臨床資料(導(dǎo)航組),男3例,女12例,年齡12～18歲,平均14.2歲。同時(shí)選取同期行徒手置釘?shù)?0名AIS患者作為對(duì)照組(徒手組),男12例,女18例,年齡11～17歲,平均14.8歲。兩組患者術(shù)前側(cè)凸Cobb角、胸椎后凸角、年齡、側(cè)凸類型相匹配。根據(jù)術(shù)后CT及容量立體渲染技術(shù)測量患者術(shù)后胸腔積液量。結(jié)果：徒手組平均胸腔積液量(130.8±81.7 m1)遠(yuǎn)大于導(dǎo)航組(22.7±13.2 m1),兩組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。徒手組凸側(cè)胸腔積液量(159.8±70.6m1)顯著大于導(dǎo)航組(23.7±13.1),兩組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。徒手組凹側(cè)胸腔積液量(111.8±59.7 m1)顯著大于導(dǎo)航組(22.3±11.7),兩組間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論：與傳統(tǒng)徒手置釘技術(shù)相比,O-arm導(dǎo)航系統(tǒng)顯著降低了AIS患者術(shù)后的胸腔積液量,進(jìn)而提高了手術(shù)的安全性和患者的滿意度。
【圖文】：

２．２邐ｓＯＢ－Ｒ基因的回收逡逑通過早期溫度梯度ＰＣ艮得到ｓＯＢ－Ｒ基因進(jìn)行擴(kuò)增最佳退火溫度為５５‘Ｃ。該逡逑溫度條件下，ｓＯＢ－民基因擴(kuò)增效率最高且堿基突變率最低。圖３－２是ｓＯＢ－民基逡逑因在５５’Ｃ的退火溫度下進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增后獲得的膠回收產(chǎn)物，大小與預(yù)測值相符。逡逑３６逡逑

２．４邐ｓＯＢ－Ｒ／邋ｐＨＢＬＶ－ＣＭＶＩＥ－ＩＲＥＳ邋Ｊｕｒｏ邋的測序逡逑將ｓＯＢ－Ｒ單克隆鑒定正確的ｓＯＢ－Ｒ／邋ｐＨＢＬＶ－ＣＭＶ舊－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏ進(jìn)行序列分逡逑析。送１００陣菌液量在鉆尚生物技術(shù)（上海）有限公司測序。測序結(jié)果如圖３－４逡逑所示。講ｓＯＢ－民擴(kuò)增基因和ＮＣＢＩ序列進(jìn)行比對(duì)，，結(jié)果顯示序列完全正確。因逡逑此，ｓＯＢ－Ｒ基因擴(kuò)增成功，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。逡逑３８逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R687.3

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本文編號(hào)：2553598