發(fā)布時(shí)間：2018-07-01 10:46

  本文選題：孤獨(dú)癥 + 丙戊酸鈉�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分建立VPA孤獨(dú)癥大鼠模型目的對(duì)孕鼠腹腔注入丙戊酸鈉(VPA),建立孤獨(dú)癥模型大鼠。方法:1.將育齡SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠和雌性大鼠同籠后,在雌性SD大鼠孕12.5d時(shí)腹腔注射VPA600mg/kg(濃度250mg/ml)或等量生理鹽水。兩組子代大鼠分別進(jìn)行三箱社交實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和自我捋毛實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)觀察,判斷是否成功建立VPA孤獨(dú)癥雄性大鼠模型。2.分組:SD母鼠孕12.5d腹腔注射生理鹽水和VPA的雄性子代分別分入對(duì)照組(Control)孤獨(dú)癥模型組(VPA組)。3.檢測(cè)指標(biāo):3.1三箱社交實(shí)驗(yàn)(three chamber sociability test)檢測(cè)兩組大鼠社交行為。3.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open-field test)檢測(cè)兩組大鼠的自發(fā)性探索運(yùn)動(dòng)活性和情緒。3.3自我捋毛實(shí)驗(yàn)(self-grooming test)檢測(cè)兩組大鼠刻板重復(fù)行為行為。結(jié)果:1.三箱實(shí)驗(yàn)顯示:VPA組大鼠在陌生鼠籠盒中停留的時(shí)間以及與陌生鼠嗅觸交流的時(shí)間明顯短于Control組(p0.05)。而在空籠盒和中間籠盒停留時(shí)間明顯長(zhǎng)于Control組(p0.05)。提示:VPA模型大鼠的社會(huì)交流行為顯著減少。2.曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)提示,相較于Control組,VPA組大鼠垂直分?jǐn)?shù)和中央運(yùn)動(dòng)次數(shù)有顯著降低(p0.05)。3.自我捋毛實(shí)驗(yàn)提示,相較于Control組,VPA組大鼠10min內(nèi)自我捋毛時(shí)間有顯著增加(p0.01)。結(jié)論SD母鼠孕12.5d腹腔注射丙戊酸鈉能夠?qū)е缕湫坌宰哟霈F(xiàn)孤獨(dú)癥特征性癥狀,成功復(fù)制穩(wěn)定的孤獨(dú)癥動(dòng)物模型。第二部分觀察VPA孤獨(dú)癥大鼠的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律目的觀察VPA孤獨(dú)癥大鼠早期生理發(fā)育以及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的特點(diǎn)。方法1.分組:對(duì)照組(Control)和孤獨(dú)癥模型組(建模成功的VPA大鼠)。2.檢測(cè)指標(biāo):2.1生理發(fā)育規(guī)律的檢測(cè)指標(biāo):兩組大鼠身長(zhǎng)、體重、尾長(zhǎng)的變化情況;睜眼、牙齒萌出、腹部毛發(fā)長(zhǎng)出、全身絨毛長(zhǎng)出、全身白毛長(zhǎng)出、耳廓分離、張耳及睪丸下降出現(xiàn)的時(shí)間。2.2中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的檢測(cè)指標(biāo):2.2.1神經(jīng)反射功能指標(biāo):兩組大鼠轉(zhuǎn)體、平面翻正、負(fù)趨地性、斷崖回避以及空中翻正現(xiàn)象的出現(xiàn)時(shí)間。2.2.2運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力和肌張力情況指標(biāo):兩組大鼠爬行和抓桿現(xiàn)象的出現(xiàn)時(shí)間、抓桿持續(xù)時(shí)間、游泳評(píng)分以及足展開(kāi)距離。2.2.3感覺(jué)功能指標(biāo):兩組大鼠聽(tīng)覺(jué)反射、視覺(jué)定位和夾尾反射現(xiàn)象的出現(xiàn)時(shí)間以及歸巢所需時(shí)間。2.3孤獨(dú)癥樣行為的檢測(cè)指標(biāo):通過(guò)三箱社交實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、自我捋毛實(shí)驗(yàn)以及水迷宮實(shí)驗(yàn),以檢測(cè)兩組大鼠社交行為、刻板行為、自發(fā)性探索運(yùn)動(dòng)活性、焦慮行為及學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果1.通過(guò)對(duì)早期生理發(fā)育情況的檢測(cè),提示:相較于Control組,VPA組大鼠身長(zhǎng)、體重在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有一定波動(dòng),但在PN28d未見(jiàn)明顯差異(p0.05);VPA組大鼠睜眼、牙齒萌出、腹部毛發(fā)長(zhǎng)出、全身絨毛長(zhǎng)出、全身白毛長(zhǎng)出、耳廓分離、張耳以及睪丸下降結(jié)果均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);但尾長(zhǎng)明顯縮短(p0.01),出現(xiàn)彎曲畸形。2.通過(guò)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育情況的檢測(cè)提示:2.1神經(jīng)反射功能指標(biāo):相較于Control組,VPA組大鼠神經(jīng)反射功能指標(biāo)中平面翻正、負(fù)趨地性、斷崖回避及空中翻正的陽(yáng)性天數(shù)均明顯延遲(p0.05),轉(zhuǎn)體的陽(yáng)性天數(shù)測(cè)試結(jié)果無(wú)明顯差異(p0.05),神經(jīng)反射發(fā)育滯后。2.2運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力和肌張力情況指標(biāo):相較于Control組,爬行的陽(yáng)性天數(shù)較晚(p0.01),VPA組大鼠抓桿持續(xù)時(shí)間明顯縮短(p0.01),PN8d和PN10d游泳評(píng)分顯著下降(p0.05),PN15d和PN30d足展開(kāi)距離增寬(p0.01),抓桿的陽(yáng)性天數(shù)無(wú)明顯改變(p0.05),運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力降低以及前后肢肌張力下降。2.3感覺(jué)功能指標(biāo):相較于Control組,VPA組大鼠聽(tīng)覺(jué)反射的陽(yáng)性天數(shù)明顯提前(p0.05),視覺(jué)定位的陽(yáng)性天數(shù)顯著滯后(p0.01),而夾尾反射的陽(yáng)性天數(shù)和歸巢所耗時(shí)間無(wú)明顯改變(p0.05),聽(tīng)覺(jué)更為靈敏而視覺(jué)較遲滯,嗅覺(jué)和痛覺(jué)無(wú)明顯變化。3.通過(guò)對(duì)兩組大鼠社交行為、刻板行為、情緒改變及學(xué)習(xí)記憶能力情況檢測(cè)提示:3.1三箱社交實(shí)驗(yàn):相較于Control組,VPA組大鼠停留在陌生鼠1籠盒的時(shí)間以及與陌生鼠1的嗅觸時(shí)間均明顯減少(p0.05),在中間籠盒和空籠盒停留時(shí)間明顯增多(p0.05),社交行為顯著減少;當(dāng)空籠子內(nèi)放入陌生鼠2后,VPA組大鼠停留在陌生鼠2籠盒的時(shí)間以及與陌生鼠2的嗅觸時(shí)間均明顯減少(p0.05),在中間籠盒和熟悉鼠(陌生鼠1)籠盒停留的時(shí)間明顯增多(p0.05),新鮮事物偏好障礙。3.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn):VPA組大鼠垂直運(yùn)動(dòng)分?jǐn)?shù)及中央運(yùn)動(dòng)均明顯減少(p0.05),陌生環(huán)境內(nèi)自發(fā)性探索行為減少,認(rèn)知能力和適應(yīng)性減弱;VPA組大鼠便溺次數(shù)無(wú)明顯改變,無(wú)明顯焦慮情緒改變。3.3自我捋毛實(shí)驗(yàn):VPA組大鼠自我捋毛時(shí)間顯著增長(zhǎng)(p0.01),刻板行為明顯增加。3.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):VPA組大鼠隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中到達(dá)目標(biāo)象限平臺(tái)潛伏期明顯增長(zhǎng)(p0.05),游泳速度減慢(p0.05);空間探索實(shí)驗(yàn)中穿越目標(biāo)象限次數(shù)以及目標(biāo)象限停留時(shí)間比明顯減低(p0.05),游泳速度減慢(p0.05),空間學(xué)習(xí)記憶能力下降。結(jié)論VPA孤獨(dú)癥大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育滯后并出現(xiàn)明顯的孤獨(dú)癥行為;但機(jī)體生理發(fā)育與對(duì)照大鼠間無(wú)明顯差異。第三部分VPA孤獨(dú)癥大鼠不同腦區(qū)內(nèi)GABA能神經(jīng)元的表達(dá)目的探討VPA孤獨(dú)癥大鼠神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育滯后及孤獨(dú)癥樣癥狀與發(fā)育中不同階段,不同腦區(qū)的GABA能神經(jīng)元異常表達(dá)是否相關(guān)。方法1.分組:對(duì)照組(Control)和孤獨(dú)癥模型組(建模成功的VPA大鼠)。2.檢測(cè)指標(biāo):2.1 Western Blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠出生后第7d、14d、28d、35d、45d以及72d時(shí),大腦前額葉皮層、顳葉皮層、體感皮層、海馬以及小腦皮層內(nèi)GAD67蛋白水平的表達(dá)。2.2免疫組化結(jié)合圖像分析檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠出生后7d、35d以及72d時(shí),大腦前額葉皮層、顳葉皮層、體感皮層、海馬以及小腦皮層中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)情況。結(jié)果1.Western Blot檢測(cè)提示,相較于Control組,VPA組大鼠出生后第7d、14d、28d、35d、45d以及72d時(shí),其大腦海馬及小腦皮層中GAD67蛋白水平均明顯減少(p0.05);前額葉皮層中GAD67蛋白水平在發(fā)育早期無(wú)變化(p0.05),45d及72d時(shí)蛋白表達(dá)增加(p0.05);顳葉皮層中GAD67蛋白水平在發(fā)育早期無(wú)明顯變化,72d時(shí)GAD67蛋白表達(dá)明顯減少(p0.05)體感皮層中GAD67蛋白水平在整個(gè)發(fā)育過(guò)程中均無(wú)明顯變化(p0.05)。2.免疫組化及圖像分析檢測(cè)提示,相較于Control組,VPA組大鼠出生后7d和35d時(shí),其大腦前額葉皮層、顳葉皮層以及體感皮層中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)沒(méi)有明顯改變(p0.05),但海馬及小腦皮質(zhì)中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元的表達(dá)均明顯減少(p0.05);VPA組大鼠出生后第72d時(shí),其大腦前額葉皮層中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元增多(p0.05),而顳葉皮層、海馬以及小腦皮層中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元顯著減少(p0.05),體感皮層中GAD67免疫陽(yáng)性神經(jīng)元無(wú)明顯改變(p0.05)。結(jié)論神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中,GABA能神經(jīng)元表達(dá)改變所導(dǎo)致的大腦興奮-抑制失衡可能是孤獨(dú)癥發(fā)病的重要因素之一。
[Abstract]:The experimental results were as follows : 1 . The rats with VPA group were injected intraperitoneally with sodium valproate ( VPA ) , and the rats were injected with VPA600 mg / kg ( concentration of 250 mg / ml ) or normal saline at 12 . 5 days . Results 1 . There was no significant difference in the number of positive days ( p . 05 ) , the positive number of days after PN15d and PN1od was significantly shorter than that in control group ( p . 05 ) . The expression of GAD67 protein in the cerebral cortex , temporal lobe cortex , cortex , hippocampus and cortex of rats with VPA group was significantly decreased ( p < 0.05 ) , and the swimming speed was slowed down ( p < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R749.94

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李珂;徐恩;;γ-氨基丁酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用及機(jī)制(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2008年03期

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本文編號(hào)：2087528