本文關(guān)鍵詞：Piwil2重編程兒童成纖維細(xì)胞形成腫瘤干細(xì)胞的初步研究

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【摘要】：目的觀察精原干細(xì)胞自我更新基因Piwil2重編程兒童成纖維細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)及功能特征變化，建立Piwil2調(diào)控腫瘤干細(xì)胞發(fā)生過(guò)程的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?方法將攜帶Piwil2-GFP標(biāo)記的和空載的目的基因GFP標(biāo)記的慢病毒載體分別感染原代培養(yǎng)的小兒包皮成纖維細(xì)胞，，篩選建立穩(wěn)定表達(dá)Piwil2-GFP和GFP成纖維細(xì)胞系，觀察細(xì)胞形態(tài)變化及腫瘤球形成過(guò)程。體外分析細(xì)胞染色體核型，RT-PCR鑒定重編程后細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)記物OCT-4,Sox2,Nanog,c-Myc,Klf-4及三胚層分化的相關(guān)標(biāo)志物Nestin,Tubb3,Brabury,CATA-4等。裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)，組織學(xué)觀察腫瘤形態(tài)，RT-PCR，免疫組織化學(xué)進(jìn)一步分析分析干細(xì)胞及各胚層指標(biāo)在裸鼠腫瘤中的表達(dá)。 結(jié)果 ①熒光顯微鏡觀察到轉(zhuǎn)染Piwil2-GFP和空載GFP成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，兩組細(xì)胞均穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光。48h流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率為51.2%和45.7%，繼續(xù)篩選培養(yǎng)后穩(wěn)定表達(dá)率約70%，且Piwil2-GFPFB細(xì)胞體積變小，形態(tài)逐漸由長(zhǎng)梭型變?yōu)閳A形并出現(xiàn)集落樣生長(zhǎng)，集落可形成圓形克隆。 ②RT-PCR檢測(cè)Piwil2-GFP FB細(xì)胞過(guò)表達(dá)Piwil2,表達(dá)干細(xì)胞多能基因Oct-4，Sox2，Nanog，Klf-4，c-Myc及三胚層分化相關(guān)基因。 ③染色體核型結(jié)果顯示Piwil2-GFP FB細(xì)胞染色體分別為67-70條的超二倍體結(jié)構(gòu),可見(jiàn)多倍體染色體。 ④“腫瘤球”樣克隆裸鼠體內(nèi)移植2周時(shí)100%形成腫瘤,腫瘤組織學(xué)及免疫組化鑒定為來(lái)表達(dá)多種外胚層,中胚層及內(nèi)胚層腫瘤標(biāo)志物的惡性腫瘤,RT-PCR顯示細(xì)胞及裸鼠腫瘤表達(dá)干細(xì)胞多能基因Oct-4，Nanog，Sox2以及三胚層特征標(biāo)記物。 結(jié)論 ①Piwil2基因成功轉(zhuǎn)染兒童成纖維細(xì)胞且細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，形成腫瘤球樣集落。 ②Piwil2重編程后的成纖維細(xì)胞具有干細(xì)胞和多潛能分化特征，致瘤性及腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R730.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉爽;段恩奎;;誘導(dǎo)產(chǎn)生多能性干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)的研究進(jìn)展[J];科學(xué)通報(bào);2008年04期

本文編號(hào)：1263904