本文關鍵詞：神經(jīng)生長因子NGF在綠殼蛋雞卵泡和輸卵管中的表達及對卵泡發(fā)育的調(diào)控

  更多相關文章： 綠殼蛋雞 神經(jīng)生長因子 卵泡 輸卵管 激素 激素受體

【摘要】：鳥類的排卵過程為卵巢發(fā)育成熟并產(chǎn)生成熟的卵泡,卵泡脫離卵巢通過輸卵管的各個部分形成完整的蛋,并最終排出。而在這個過程中卵巢和輸卵管受到諸多的生長因子和激素的調(diào)控。通過選育培養(yǎng)出的蛋雞在進入高產(chǎn)期后幾乎每天產(chǎn)蛋,其原因在于蛋雞卵泡在生殖階段可持續(xù)發(fā)育、并排卵和受精,卵巢排卵后亦不形成黃體,生殖周期極短,是作為生殖系統(tǒng)研究的理想試驗動物。本試驗以中國地方特色蛋雞品種綠殼蛋雞為試驗材料,測定不同產(chǎn)蛋時期的等級前卵泡、優(yōu)勢等級卵泡和輸卵管中的神經(jīng)生長因子NGF及其受體的mRNA表達量,并對產(chǎn)蛋期和就巢期的組織進行NGF及其受體的表達對比,同時通過體外培養(yǎng)的方式對綠殼蛋雞的F1卵泡顆粒細胞培養(yǎng)并添加NGF蛋白,測定各個受體的mRNA表達量和性腺激素的分泌量。結(jié)果如下：通過對綠殼蛋雞不同產(chǎn)蛋階段(19W、33W、50W、64W)的生殖組織進行采樣并提取mRNA,并進行熒光定量對其卵泡和輸卵管的NGF及其受體的mRNA表達量測定。結(jié)果表明：NGF在綠殼蛋雞各個產(chǎn)蛋時期中的卵泡和輸卵管中都有表達；在等級前卵泡中,除了產(chǎn)蛋末期外,其他時期的小白卵泡SWF的NGF和其高親和力受體酪氨酸激酶A (TrkA)的mRNA表達量要顯著高于其他等級前卵泡(P0.05),且隨著等級前卵泡的發(fā)育,NGF的表達量呈現(xiàn)下降的趨勢,而在整個產(chǎn)蛋時期中,NGF在產(chǎn)蛋高峰期表達量最高；在等級卵泡中,NGF及其受體在F4卵泡中表達量在各時期都較高,且在產(chǎn)蛋前期和高峰期,F1-F4的mRNA表達量都高于F5的mRNA表達量,而在整個產(chǎn)蛋周期中,NGF的表達量在產(chǎn)蛋高峰期處于峰值；每個時期的輸卵管各部位都有NGF的表達,且表達量隨著綠殼蛋雞產(chǎn)蛋周期的變化而變化,在產(chǎn)蛋后期NGF及其高親和力受體表達量最高。以上結(jié)果說明,NGF的表達量與蛋雞的生殖狀況和產(chǎn)蛋性能相關,推測NGF可能參與了調(diào)控卵巢和輸卵管生長發(fā)育并有助于蛋雞產(chǎn)蛋。利用熒光定量測定方法對綠殼蛋雞產(chǎn)蛋期和就巢期各組織的NGF及其受體的表達進行研究。結(jié)果表明：產(chǎn)蛋期的卵巢大于就巢期卵巢,且具有小黃卵泡SYF和F1-F6卵泡,而就巢期卵巢處于萎縮形態(tài),沒有優(yōu)勢卵泡；在產(chǎn)蛋期的卵巢基質(zhì)中,NGF及其受體顯著高于就巢期(P0.05)；在等級前卵泡中,SWF和LWF中的NGF及其高親和力受體在產(chǎn)蛋期的mRNA的表達量顯著高于就巢期(P0.05)。以上結(jié)果說明NGF及其受體在卵巢組織中的表達與禽類產(chǎn)蛋周期有影響,并可能參與了禽類產(chǎn)蛋時期與就巢時期的調(diào)控,NGF的表達有助于激活非發(fā)情期卵巢并改變卵巢形態(tài),促使等級前卵泡發(fā)育成為等級優(yōu)勢卵泡。通過對F1卵泡顆粒細胞離體培養(yǎng),添加NGF蛋白并進行受體基因的熒光定量及激素的Elisa檢查,探究NGF蛋白在蛋雞卵泡發(fā)育過程中的作用。結(jié)果表明：在添加不同濃度NGF蛋白處理后,顆粒細胞中的p75受體的表達量顯著升高(P0.05),且隨著NGF蛋白的濃度升高而升高；處理不同濃度的NGF蛋白后,顆粒細胞中的FSHR和LHR也顯著升高(P0.05),且存在正相關關系；通過Elisa檢查發(fā)現(xiàn),添加NGF蛋白處理后的顆粒細胞中雌激素的分泌顯著升高(P＜0.05),而孕激素則相反;在依次添加NGF和FSH處理后發(fā)現(xiàn),雌激素的分泌在單獨添加NGF和FSH時都將顯著升高(P0.05),而且同時添加有疊加效果,而孕激素的分泌則相反。以上結(jié)果表明,NGF在禽類卵泡中能促進其LHR和FSHR的表達,通過加強細胞對激素的敏感性來調(diào)控卵泡的發(fā)育和排卵,并且影響動物的生理周期。綜上所述,NGF及其受體能促進禽類早期卵巢和輸卵管的生長和發(fā)育,并在卵巢和輸卵管成熟后,促進卵巢卵泡的發(fā)育以及排卵,同時在也影響雞的生殖周期。
【關鍵詞】：綠殼蛋雞 神經(jīng)生長因子 卵泡 輸卵管 激素 激素受體
【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 縮寫對照表10-13
• 1 文獻綜述13-26
• 1.1 NTs家族及其受體14-17
• 1.1.1 NTs家族成員14-15
• 1.1.2 NTs家族受體15-16
• 1.1.3 NTs家族與其受體的結(jié)合方式16-17
• 1.2 神經(jīng)生長因子及其受體17-21
• 1.2.1 神經(jīng)生長因子結(jié)構17-18
• 1.2.2 神經(jīng)生長因子受體結(jié)構18-19
• 1.2.3 神經(jīng)生長因子的作用機制19-21
• 1.3 神經(jīng)生長因子及其受體在雌性生殖系統(tǒng)中的作用21-23
• 1.3.1 卵巢21-23
• 1.3.2 輸卵管23
• 1.4 禽類生殖系統(tǒng)的發(fā)育23-26
• 1.4.1 禽類的卵泡發(fā)育23-24
• 1.4.2 禽類輸卵管發(fā)育24
• 1.4.3 性腺激素24-26
• 1.5 本研究的目的意義26
• 2 材料與方法26-33
• 2.1 試驗材料26-29
• 2.1.1 試驗動物選擇26-27
• 2.1.2 主要試劑及試劑盒27
• 2.1.3 主要試劑配制27-28
• 2.1.4 主要儀器設備28-29
• 2.2 試驗方法29-33
• 2.2.1 樣品采集29
• 2.2.2 雞卵巢顆粒細胞培養(yǎng)29-30
• 2.2.3 顆粒細胞NGF蛋白處理30
• 2.2.4 顆粒細胞NGF蛋白及FSH處理30
• 2.2.5 總RNA提取30-31
• 2.2.6 總RNA質(zhì)量和濃度的檢測31
• 2.2.7 逆轉(zhuǎn)錄31-32
• 2.2.8 實時熒光定量(參照寶生物說明書)32
• 2.2.9 Elisa檢測(參照Elisa說明書)32-33
• 2.3 數(shù)據(jù)分析33
• 3 結(jié)果與分析33-43
• 3.1 不同產(chǎn)蛋階段綠殼蛋雞NGF及其受體mRNA組織表達量33-37
• 3.1.1 等級前卵泡NGF及其受體的表達33-34
• 3.1.2 等級卵泡NGF及其受體的表達34-35
• 3.1.3 輸卵管NGF及其受體的表達35-36
• 3.1.4 不同階段NGF及其受體的表達趨勢36-37
• 3.2 綠殼蛋雞產(chǎn)蛋期和就巢期NGF及其受體的組織表達差異37-40
• 3.3 NGF對顆粒細胞的影響40-43
• 3.3.1 NGF對顆粒細胞TrkA和p75受體基因表達影響40
• 3.3.2 NGF對顆粒細胞激素受體表達影響40-41
• 3.3.3 NGF對顆粒細胞雌激素和孕激素分泌影響41-42
• 3.3.4 NGF和FSH對顆粒細胞雌激素和孕激素分泌影響42-43
• 4 討論43-48
• 4.1 NGF及其受體在卵巢中的表達43-44
• 4.2 NGF及其受體在輸卵管中的表達44-45
• 4.3 NGF對產(chǎn)蛋周期的調(diào)節(jié)45-46
• 4.4 NGF對顆粒細胞受體基因表達影響46-47
• 4.5 NGF對顆粒細胞雌激素和孕激素分泌影響47-48
• 5 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士研究生期間發(fā)表的論文和專利57

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