本文關鍵詞：攜病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導宿主TLRs表達及細胞因子分泌的研究

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【摘要】：雞球蟲病是由頂復門艾美耳屬的球蟲寄生于雞的腸上皮細胞內(nèi)所引起的一種原蟲病,是世界范圍內(nèi)最嚴重的家禽寄生蟲病之一,嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展。雞球蟲病被美國農(nóng)業(yè)部列為對禽類危害最為嚴重的五大疾病之一,對我國乃至全世界的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。Toll樣受體(Toll-like receptors,TLR)是一類高度保守的蛋白質(zhì)家族,通過啟動宿主的免疫應答對病原體進行識別,在減少和清除病原體中起重要作用。在雞體內(nèi)已經(jīng)鑒定出的TLR基因至少10個,Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21為識別病毒的受體。周作勇等(2011)、秦波等(2012)、Zhang等(2012)報道柔嫩艾美耳球蟲在感染過程中能夠被天然免疫系統(tǒng)所識別,引起多種Ch TLRs的表達變化。Han等(2011)報道首次在柔嫩艾美耳球蟲中發(fā)現(xiàn)病毒樣粒子。Wu等(2016)破譯柔嫩艾美耳球蟲病毒全基因組。病毒粒子的存在可能影響宿主天然免疫系統(tǒng)對柔嫩艾美耳球蟲的識別。目前關于攜病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導宿主TLRs表達的變化等研究尚未見報道。本試驗通過攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導宿主TLRs表達的變化、炎性因子分泌和雛雞盲腸病變的觀察研究,以初步確定攜病毒柔嫩艾美耳球蟲感染激活宿主天然免疫TLRs信號通路的作用。為揭示雞體抗柔嫩艾美耳球蟲感染的天然免疫機理等奠定基礎。主要研究內(nèi)容如下:攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導雞巨噬細胞TLRs m RNA表達的變化用攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲刺激雞巨噬細胞,分別于不同時間(0h,1h,2h,4h,6h,8h)收集雞巨噬細胞提取總RNA,然后用q RT-PCR檢測雞TLRs(Ch TLRs)表達的動態(tài)變化。結果表明,攜病毒柔嫩艾美耳球蟲刺激雞巨噬細胞引起Ch TLR1、4、7、15和21 m RNA表達水平上調(diào),Ch TLR2、3和5 m RNA表達水平下調(diào)。無病毒柔嫩艾美耳球蟲刺激雞巨噬細胞引起Ch TLR1、4、15和21 m RNA表達水平上調(diào),Ch TLR2、3、5和7 m RNA表達水平下調(diào)。表明攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲刺激雞巨噬細胞后誘導多種TLRs表達水平的動態(tài)變化。與無病毒組相比,在8h時攜病毒組Ch TLR3 m RNA表達水平明顯升高,攜病毒組Ch TLR7表達水平上調(diào)而無病毒組下調(diào),攜病毒組Ch TLR21表達水平上調(diào)比無病毒組顯著,表明Ch TLR3、Ch TLR7、Ch TLR21可能與雞體抗柔嫩艾美耳球蟲病毒的先天性免疫應答有關。攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導雛雞盲腸TLRs m RNA表達的變化用攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲分別感染雛雞,并設置健康對照組。采用q RT-PCR方法檢測感染后2h,6h,12h,24h,48h,72h雛雞盲腸組織TLRs m RNA表達水平。結果表明,攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲感染雛雞后均可誘導盲腸上皮細胞多種Ch TLR1、2、3、4、5、7、15和21 m RNA表達水平的動態(tài)變化。攜病毒柔嫩艾美耳球蟲感染雞后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表達水平在感染后第6h均達到最高值。而無病毒柔嫩艾美耳球蟲感染雞后,Ch TLR1、2、4、5、7、15和21 m RNA表達水平均在感染后24h達到最高值。這種時間差異表明感染攜病毒柔嫩艾美耳球蟲組比感染無病毒柔嫩艾美耳球蟲組更早的引起免疫應答。攜病毒組在感染后24h Ch TLR3 m RNA的表達水平上調(diào)并達到高峰。識別病毒的受體Ch TLR3、Ch TLR7和Ch TLR21變化可能與雞體抗柔嫩艾美耳球蟲病毒的先天性免疫應答有關。感染攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲雛雞IL-6和IFN-β的分泌及盲腸病變觀察采集感染攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲雛雞血清,用ELISA方法檢測IL-6和IFN-β的分泌水平,并將感染后的雛雞盲腸制作石蠟切片觀察病變。結果表明,感染攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲組IL-6和IFN-β均有上調(diào),攜病毒組IL-6和IFN-β分泌水平較無病毒組高。感染攜病毒柔嫩艾美耳球蟲的雛雞盲腸較感染無病毒柔嫩艾美耳球蟲的雛雞表現(xiàn)出更為嚴重的水腫、腸上皮細胞碎裂崩解、腸黏膜破損斷裂等病理變化。初步推斷宿主抗攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲感染和蟲體致病機制可能不同。
【關鍵詞】：攜病毒柔嫩艾美耳球蟲 無病毒柔嫩艾美耳球蟲 Toll樣受體 細胞因子 病理變化
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 前言13-15
• 第一篇 文獻綜述15-26
• 第1章 雞球蟲病的免疫學研究15-19
• 1.1 艾美耳球蟲的免疫原性15-16
• 1.2 宿主對艾美耳球蟲的免疫應答16-19
• 第2章 雞TLRs及其與病原感染研究概況19-24
• 2.1 ChTLRs的結構、特點及識別的配體20-21
• 2.2 ChTLRs與細菌感染21
• 2.3 ChTLRs與病毒感染21-22
• 2.4 ChTLRs與寄生蟲感染22-24
• 第3章 艾美耳球蟲病毒的研究進展24-26
• 第二篇 研究內(nèi)容26-57
• 第1章 攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導雞巨噬細胞TLRsmRNA表達的變化26-40
• 1.1 材料與方法26-32
• 1.2 結果32-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結39-40
• 第2章 攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲誘導雛雞盲腸TLRsmRNA表達的變化40-50
• 2.1 材料與方法40-42
• 2.2 結果42-47
• 2.3 討論47-48
• 2.4 小結48-50
• 第3章 感染攜病毒和無病毒柔嫩艾美耳球蟲雛雞IL-6 和IFN-β 的分泌及盲腸病變觀察50-57
• 3.1 材料與方法50-52
• 3.2 結果52-55
• 3.3 討論55-56
• 3.4 小結56-57
• 結論57-58
• 參考文獻58-66
• 導師簡介66-67
• 作者簡介及科研成果67-68
• 致謝68

【參考文獻】

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本文編號：911549