本文關鍵詞：IUGR新生仔豬肝臟生長和代謝相關蛋白表達規(guī)律的研究

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【摘要】：宮內(nèi)發(fā)育遲緩(Intrauterine growth restriction,IUGR)是指哺乳動物的胚胎或者胎兒及其器官在妊娠期間生長發(fā)育受阻。在動物生產(chǎn)中,大約15~20%的新生仔豬有較低的出生重(1.1 kg),并遭受著IUGR的影響。IUGR新生仔豬具有較高的發(fā)病率和致死率、較低的飼料利用率、消極的影響肉品質(zhì)以及仔豬后期的健康狀況等,對畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了嚴重的損失。肝臟作為營養(yǎng)物質(zhì)吸收和代謝的重要器官。然而,在妊娠期間,IUGR卻削弱了肝臟的生長發(fā)育。與正常新生仔豬相比,IUGR新生仔豬肝臟的重量顯著降低。在后期的生長發(fā)育過程中,IUGR胎兒的肝臟還伴隨著代謝紊亂,如氧化磷酸化降低、線粒體功能削弱等。因此,進一步研究IUGR對仔豬肝臟的生長發(fā)育和代謝的影響,有利于找到新的策略來預防和治療IUGR。本研究主要運用iTRAQ技術(shù)來鑒定IUGR新生仔豬肝臟中的差異表達蛋白,并通過對差異表達蛋白進行生物信息學分析,更加全面的了解參與調(diào)控IUGR形成的關鍵蛋白及信號通路。我們選取3頭正常新生仔豬肝臟和3頭IUGR新生仔豬肝臟,進行iTRAQ試驗。在三個生物學重復中,分別有2689、2666、2669個被定量到的蛋白質(zhì),其中2635個蛋白質(zhì)在三個重復中共有。重復1、重復2和重復3分別有517、359和191個差異表達蛋白。另外,為了提高iTRAQ試驗的準確性,我們將至少在兩個生物學重復中是差異表達蛋白,在第三個生物學重復中有相同變化趨勢的蛋白定義為差異候選蛋白。最后,得到了78個差異候選蛋白,包括31個顯著性上調(diào)蛋白和47個顯著性下調(diào)蛋白。差異候選蛋白的功能分類分析結(jié)果顯示,這些差異候選蛋白參與到了碳水化合物代謝、蛋白質(zhì)合成、能量產(chǎn)生、脂質(zhì)代謝以及器官組織的發(fā)育等生物學過程。信號通路分析的結(jié)果顯示,蛋白質(zhì)合成的相關的信號通路受到抑制,包括EIF2信號通路、e IF4和p70S6K的調(diào)節(jié)信號通路以及mTOR信號通路,自噬相關信號通路(吞噬體成熟)也受到抑制。另外,與營養(yǎng)物質(zhì)代謝相關的信號通路受到顯著性影響,比如色氨酸降解、羊毛甾醇合成、膽堿的降解以及氧化磷酸化等�；プ骶W(wǎng)絡分析的結(jié)果顯示,差異候蛋白分布于5個互作網(wǎng)絡,這些互作網(wǎng)絡與發(fā)育紊亂、營養(yǎng)物質(zhì)代謝(脂質(zhì)代謝和能量產(chǎn)生)密切相關。其中,在得分最高的互作網(wǎng)絡中,蛋白PP2Ac顯著性下調(diào)。之前有研究報道,PP2Ac與早期胚胎發(fā)育、葡萄糖代謝以及自噬等都有密切的關系。我們的試驗結(jié)果也顯示,在HepG2細胞中,葡萄糖缺失的條件下,PP2Ac的抑制可以顯著地激活AMPK和抑制自噬。因此,PP2Ac下調(diào)很可能是影響IUGR仔豬肝臟發(fā)育以及抑制由葡萄糖缺失誘導的自噬的一個關鍵因素。綜上所述,得出以下結(jié)論:(1)能量產(chǎn)生、脂質(zhì)代謝等營養(yǎng)代謝通路受到IUGR影響;(2)蛋白質(zhì)合成信號通路在IUGR新生仔豬肝臟中受到抑制;(3)自噬相關信號通路在IUGR新生仔豬肝臟中受到抑制;(4)PP2Ac下調(diào)很可能是影響IUGR仔豬肝臟發(fā)育以及抑制由葡萄糖缺失誘導的自噬的一個關鍵因素。
【關鍵詞】：IUGR 自噬 mTOR PP2A iTRAQ
【學位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S828
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 縮略語表（Abbreviation）11-13
• 第一章 文獻綜述13-25
• 1.1 宮內(nèi)發(fā)育遲緩13-15
• 1.1.1 宮內(nèi)發(fā)育遲緩的定義13
• 1.1.2 宮內(nèi)發(fā)育遲緩對新生仔豬肝臟的影響13-14
• 1.1.3 宮內(nèi)發(fā)育遲緩新生仔豬的營養(yǎng)調(diào)控14-15
• 1.2 mTOR信號通路15-19
• 1.2.1 mTOR的定義15
• 1.2.2 mTOR的生物學作用和功能15-19
• 1.3 細胞自噬19-21
• 1.3.1 自噬的定義19-20
• 1.3.2 細胞自噬的生物學作用和功能20-21
• 1.4 蛋白磷酸酶 2A21-22
• 1.4.1 PP2A的定義21-22
• 1.4.2 PP2Ac的生理作用22
• 1.5 定量蛋白質(zhì)組學—iTRAQ技術(shù)22-24
• 1.6 本研究的目的與意義24-25
• 第二章 材料與方法25-34
• 2.1 試驗材料25-26
• 2.1.1 試驗動物25
• 2.1.2 主要藥品及試劑25
• 2.1.3 試驗緩沖液及其配制25-26
• 2.2 試驗方法26-34
• 2.2.1 動物肝臟樣品的采集26-27
• 2.2.2 iTRAQ試驗步驟27-30
• 2.2.3 差異蛋白的生物信息學分析30-31
• 2.2.4 細胞培養(yǎng)主要步驟31-32
• 2.2.5 細胞蛋白質(zhì)提取32
• 2.2.6 Western blot32-34
• 第三章 結(jié)果與分析34-49
• 3.1 IUGR新生仔豬肝臟差異蛋白的鑒定及篩選34-41
• 3.1.1 IUGR新生仔豬肝臟蛋白的鑒定與定量34-38
• 3.1.2 IUGR新生仔豬肝臟差異蛋白的篩選38-41
• 3.2 差異候選蛋白的生物信息學分析41-46
• 3.2.1 差異候選蛋白的亞細胞定位分析41-42
• 3.2.2 差異候選蛋白的功能分類分析42-43
• 3.2.3 差異候選蛋白參與的信號通路分析43-45
• 3.2.4 差異候選蛋白的互作網(wǎng)絡分析45-46
• 3.3 PP2Ac對葡萄糖饑餓誘導的自噬的影響46-49
• 3.3.1 PP2Ac抑制劑濃度的選擇46-47
• 3.3.2 葡萄糖缺失條件下，抑制PP2Ac對AMPK-mTOR-自噬的影響47-49
• 第四章 討論與小結(jié)49-53
• 參考文獻53-61
• 致謝61-62
• 附錄 在校期間發(fā)表論文62

【參考文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃雪新;IUGR對新生仔豬肝脾免疫功能的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2011年

2 杜偉;胰島素及酪蛋白酶解物對新生IUGR仔豬肝臟生長發(fā)育的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學;2007年

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本文編號：616925