前列腺素E2是一種重要的炎性介質(zhì),是由環(huán)氧合酶催化花生四烯酸代謝產(chǎn)生的一種二十碳不飽和脂肪酸,當(dāng)機(jī)體組織器官受到細(xì)菌毒素侵害后,細(xì)胞產(chǎn)生包括前列腺素E2在內(nèi)的大量的炎癥介質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)通過利用細(xì)菌脂多糖刺激奶牛輸卵管上皮細(xì)胞,檢測(cè)與前列腺素E2和F2α有關(guān)的合成酶的表達(dá)狀況,以及脂多糖對(duì)前列腺素E2和F2a合成分泌的影響。旨在闡明感染G-致病菌時(shí),奶牛輸卵管過量分泌前列腺素E2和F2α的病理學(xué)機(jī)制,為治療由炎癥引起的輸卵管分泌失調(diào)病癥搜集基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法：1)建立奶牛輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)。2)不同濃度1μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL的LPS作用于奶牛輸卵管上皮細(xì)胞培養(yǎng)24h,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)COX-1、COX-2mRNA表達(dá)量,以確定LPS的最佳作用濃度。3)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)LPS不同作用時(shí)間(2h、4h、8h、16h、24h、48h、72h)對(duì)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞COX-1、COX-2、mPGES-1、 mPGES-2、cPGES和PGFS mRNA表達(dá)的影響。4)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)COX抑制...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
插圖和附表清單
縮略語表
1 前言
    1.1 前列腺素類化合物
        1.1.1 前列腺素類化合物的生殖生理作用
        1.1.2 前列腺素類化合物的生殖病理作用
    1.2 前列腺素類化合物對(duì)輸卵管的調(diào)節(jié)功能
        1.2.1 輸卵管組織形態(tài)結(jié)構(gòu)
        1.2.2 輸卵管功能及前列腺素類化合物的作用
    1.3 輸卵管炎癥
    1.4 細(xì)菌毒素脂多糖
    1.5 NF-κ B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
    1.6 研究目的與意義
2 實(shí)驗(yàn)部分
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 奶牛輸卵管
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 奶牛輸卵管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.2.2 奶牛輸卵管上皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)
        2.2.3 MTT法檢測(cè)LPS對(duì)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞存活率檢測(cè)
        2.2.4 確定LPS刺激奶牛輸卵管上皮細(xì)胞的藥物作用濃度試驗(yàn)
        2.2.5 檢測(cè)PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表達(dá)量的影響
        2.2.6 有關(guān)抑制劑對(duì)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞COXs及PGs mRNA表達(dá)量的影響
        2.2.7 總RNA的提取
        2.2.8 cDNA的制備及Real Time PCR的準(zhǔn)備
        2.2.9 奶牛輸卵管上皮細(xì)胞PGE₂、PGF_2α含量的測(cè)定
    2.3 數(shù)據(jù)處理分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分
    3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率結(jié)果
    3.3 線性分析及特異性檢測(cè)
        3.3.1 擴(kuò)增效率曲線分析
        3.3.2 擴(kuò)增及溶解曲線分析
    3.4 LPS刺激奶牛輸卵管上皮細(xì)胞作用濃度的確定試驗(yàn)
    3.5 LPS刺激對(duì)PGE₂和PGF_2α合成酶mRNA表達(dá)的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系
        3.5.1 LPS對(duì)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞COX-1、COX-2 mRNA表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系
        3.5.2 LPS對(duì)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞mPGES-1、mPGES-2、cPGES、PGFS mRNA表達(dá)的時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系
    3.6 有關(guān)抑制劑類藥物對(duì)LPS誘導(dǎo)奶牛輸卵管上皮細(xì)胞PGs合成酶表達(dá)量的影響
    3.7 奶牛輸卵管上皮細(xì)胞PGE₂、PGF_2α含量的測(cè)定
        3.7.1 蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線及PGE₂、PGF_2αELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.7.2 LPS刺激奶牛輸卵管上皮細(xì)胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影響
        3.7.3 相關(guān)抑制劑對(duì)LPS所致奶牛輸卵管上皮細(xì)胞合成分泌PGE₂、PGF_2α的影響
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：4042222