為了研究一種更為高效、廉價的豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）亞單位疫苗,針對PCV2b型Cap基因核酸序列進行優(yōu)化,將其編碼中和表位²²⁶LKDPPLNP²³³的基因序列連接于Cap基因C端（Capc）,并插入PE-Sumo載體,借助大腸桿菌表達系統(tǒng)對Capc蛋白進行表達;利用SDS-PAGE、Western blot、動態(tài)光散射和透射電鏡觀察等手段,對純化后的目的蛋白活性及其形成的結(jié)構(gòu)進行初步鑒定。結(jié)果顯示,嵌合Capc基因片段成功插入PE-Sumo載體,并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）中; Sumo-Capc重組蛋白在26℃下誘導(dǎo)12 h能夠以可溶形式大量表達;經(jīng)純化的Capc蛋白能夠與PCV2單克隆抗體特異結(jié)合,并能夠自組裝形成直徑約為18 nm的病毒樣顆粒。綜上,成功構(gòu)建了能夠表達PCV2b型中和表位嵌合Cap的大腸桿菌表達系統(tǒng),純化得到的Capc蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性,且能夠自組裝成病毒樣顆粒。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 載體、菌種及主要試劑
    1.2 重組表達質(zhì)粒的制備和重組表達菌體的構(gòu)建
    1.3 重組蛋白表達條件的優(yōu)化和可溶性分析
    1.4 重組蛋白的純化及免疫反應(yīng)性鑒定
    1.5 PCV2 VLP動態(tài)光散射鑒定及電鏡觀察
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組表達載體PE-Sumo-Capc構(gòu)建及鑒定
    2.2 重組Sumo-Capc蛋白表達條件的優(yōu)化和可溶性分析
    2.3 重組Sumo-Capc蛋白的純化、酶切和Western blot鑒定
    2.4 PCV2病毒樣顆粒物理特性鑒定
3 結(jié)論與討論



本文編號：4018918