豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、皮炎腎病綜合征（PDNS）和母豬繁殖障礙等癥狀的主要病原物，所有這些癥狀被統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒相關(guān)病(PCVAD)。自1991年P(guān)MWS在加拿大被首次報(bào)道至今，該病目前已經(jīng)遍布世界各地，在我國豬群中感染發(fā)病情況也十分普遍，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 PCV2無囊膜，其基因組為共價(jià)閉合、單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA，大小約1.76kb。PCV2ORF2編碼的的結(jié)構(gòu)蛋白Cap是其最主要的免疫保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體，是研制PCV2新型疫苗的理想靶抗原。國內(nèi)外現(xiàn)有的PCV2商品化疫苗因其工藝繁瑣、價(jià)格昂貴限制了疫苗的普及應(yīng)用。 新城疫病毒（NDV）反向遺傳操作技術(shù)的發(fā)展為NDV作為疫苗載體防制哺乳動(dòng)物疾病開辟了道路。本研究的目的是為了探索PCV2的衣殼蛋白重組NDV后在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)情況，從而為研制新型PCV2疫苗提供一種思路。 本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株的反向遺傳操作平臺(tái)，成功構(gòu)建表達(dá)PCV2aCap蛋白的重組病毒rLa-PCV2/Cap；為了進(jìn)一步增...

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
1 引言
    1.1 病原學(xué)
    1.2 流行病學(xué)
    1.3 臨診癥狀及病理變化
    1.4 PCV2 的致病機(jī)理
    1.5 PCV2 的分子生物學(xué)
    1.6 PCV2 疫苗研究進(jìn)展
        1.6.1 PCV2 滅活疫苗
        1.6.2 PCV2 弱毒疫苗
        1.6.3 PCV2 基因工程疫苗
    1.7 NDV 作為活病毒
2 材料與方法
    2.1 細(xì)胞、病毒和質(zhì)粒
    2.2 高免血清及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.3 主要試劑與儀器
    2.4 方法
        2.4.1 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.4.2 cap 及其改造后基因的擴(kuò)增和序列分析
        2.4.3 重組病毒基因組全長 cDNA 的構(gòu)建
        2.4.4 病毒的拯救
        2.4.5 重組病毒的 RT-PCR 鑒定
        2.4.6 重組病毒的間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）
        2.4.7 重組病毒在雞胚內(nèi)生長特性測(cè)定
        2.4.8 重組病毒致病性實(shí)驗(yàn)
            2.4.8.1 雞胚平均致死時(shí)間（MDT）測(cè)定
            2.4.8.2 重組病毒的雞腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）測(cè)定
            2.4.8.3 重組病毒的靜脈內(nèi)致病指數(shù)（IVPI）測(cè)定
3 結(jié)果與分析
    3.1 重組 NDV 基因組全長 cDNA 的構(gòu)建
    3.2 重組病毒的拯救
    3.3 重組病毒 RT-PCR 鑒定
    3.4 IFA 檢測(cè)外源蛋白表達(dá)
        3.4.1 IFA 檢測(cè) PCV2-Cap 蛋白的表達(dá)
        3.4.2 IFA 檢測(cè)改造后 Cap 蛋白的表達(dá)
    3.5 重組病毒雞胚內(nèi)的生長特性
    3.6 重組病毒的致病性實(shí)驗(yàn)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝



本文編號(hào)：4011554