干擾素刺激基因(STING)和TANK結合激酶1(TBK1)是介導宿主Ⅰ型干擾素抗病毒應答的關鍵因子。為深入研究STING和TBK1在山羊天然免疫應答中的作用,采用RT-qPCR方法進行了STING和TBK1組織特異性表達檢測,并進行了其組織分布的研究。由于物種差異較大,缺乏山羊STING的商品化抗體,本試驗首先利用原核表達的STING蛋白制備了多克隆抗體。結果顯示,利用原核表達的STING重組蛋白免疫新西蘭大白兔后,經(jīng)ELISA和Western-blot證明獲得了特異性好的多克隆抗體。組織特異性表達檢測結果顯示,STING在腸系膜淋巴結、心臟和脾的相對表達水平較高,而TBK1在大腦、肝、心臟和腎的相對表達水平較高。免疫組織化學檢測結果顯示,在心肌細胞、肝細胞、淋巴細胞、細支氣管上皮細胞、腎小管上皮細胞和大腦皮層神經(jīng)元中均呈STING和TBK1陽性。研究結果為進一步探索STING和TBK1在山羊天然免疫應答中的作用提供了基礎數(shù)據(jù)。

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圖1pET-30a(＋)－STING的誘導和純化蛋白SDS-PAGE及Western-blot分析

中國獸醫(yī)科學第50卷2.2海南黑山羊STING和TBK1基因的實時熒光定量檢測實時熒光定量PCR檢測結果顯示，海南黑山羊STING、TBK1和β-actin基因的熔解曲線峰平滑、單一、擴增特異性好。STING和TBK1基因在所有檢測組織中均有表達，其中STING基因在腸系膜淋巴結....

圖2海南黑山羊STING（A）和TBK1（B）在各組織中相對表達Figure2TherelativeexpressionlevelsofSTING(A)andTBK10STI1234567

中國獸醫(yī)科學第50卷2.2海南黑山羊STING和TBK1基因的實時熒光定量檢測實時熒光定量PCR檢測結果顯示，海南黑山羊STING、TBK1和β-actin基因的熔解曲線峰平滑、單一、擴增特異性好。STING和TBK1基因在所有檢測組織中均有表達，其中STING基因在腸系膜淋巴結....

圖3海南黑山羊STING和TBK1蛋白組織特異性的分布

第8期張彭濤等：山羊STING和TBK1基因組織特異性表達和分布的研究胞中的陽性定位與STING蛋白相似，兩者之間陽性表達程度不同（圖3H、I、J、K、L、M和N）。3討論STING和TBK1是細胞抗病毒反應的核心因子，在Ⅰ型IFN誘導中起關鍵作用。關于STING和TBK1的研究....

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