發(fā)布時(shí)間：2024-05-12 08:16

　　為分析山羊支原體山羊肺炎亞種(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)氨基肽酶M17的特征及細(xì)胞定位。參照GenBank中Mccp M1601株的M17基因序列,優(yōu)化密碼子,合成原核表達(dá)載體pET30a-M17,將鑒定正確的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 (DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后獲得融合表達(dá)蛋白;用其免疫新西蘭兔,制備超免疫血清,并測(cè)定其效價(jià)和代謝抑制效果;通過Western-blot和i ELISA兩種方法對(duì)M17在Mccp細(xì)胞內(nèi)的分布進(jìn)行了初步研究。結(jié)果顯示,pET30a-M17重組蛋白在大腸桿菌中獲得成功表達(dá),大小約50 ku,與預(yù)期相符,密碼子優(yōu)化后的表達(dá)產(chǎn)物以可溶性和包涵體兩種形式存在;免疫后的兔血清抗體效價(jià)達(dá)1∶80 000以上,說明M17重組蛋白具有較好的免疫原性和反應(yīng)活性;M17多抗血清對(duì)Mccp無代謝抑制作用,但能夠與Mccp的膜蛋白、胞漿蛋白及全菌蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),表明M17蛋白在Mccp的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中均有分布,但細(xì)胞膜中含量略高于細(xì)胞漿。M17的成功表達(dá)以及在Mccp中的細(xì)胞定位為其生物學(xué)功能研究奠...

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圖1重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-M17的雙酶切鑒定Figure1Thedoubleenzymedigestionidentificationofpla-200bp

ker；1：Mccpwholeprotein；2：Mccpcystolprotein；3：Mccpmembraneprotein.圖2pET30a-M17表達(dá)的SDS-PAGE分析Figure2SDS-PAGEanalysisontheexpressionofpET30a-M17....

圖3SDS-PAGE分析Mccp各種蛋白的提取結(jié)果

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖3SDS-PAGE分析Mccp各種蛋白的提取結(jié)果Figure3SDS-PAGEanalysisof3typesofMccpproteinsextractedM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：Mccp全菌蛋白；2：Mccp胞漿蛋白；3：Mccp膜蛋白。M：Prote....

圖2pET30a-M17表達(dá)的SDS-PAGE分析

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖3SDS-PAGE分析Mccp各種蛋白的提取結(jié)果Figure3SDS-PAGEanalysisof3typesofMccpproteinsextractedM：蛋白質(zhì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：Mccp全菌蛋白；2：Mccp胞漿蛋白；3：Mccp膜蛋白。M：Prote....

圖4M17蛋白在Mccp細(xì)胞中分布的Western-blot分析

?布多于細(xì)胞質(zhì)。2.5Mccp代謝抑制試驗(yàn)培養(yǎng)48h后，第12列對(duì)照孔已經(jīng)變黃，全菌多抗血清2－10孔變?yōu)辄S色，M17多抗血清2－1～2－6孔顏色變黃，2－7～2－10孔未變色；繼續(xù)培養(yǎng)至第72小時(shí)，全菌多抗血清2－1～2－6孔顏色依然是紅色，2－7～2－10孔變?yōu)辄S色，而M17....

本文編號(hào)：3971110