新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的禽類的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病,世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須報告的傳染病,我國將其列為一類動物疫病。NDV只有單一血清型,但存在多種基因型,目前我國主要流行的是Class Ⅱ類型中基因Ⅶ毒株,常規(guī)疫苗株B1、Clone30、La Sota及V4疫苗株屬于基因Ⅰ型和Ⅱ型,不能有效防控基因Ⅶ型毒株。因此,應迫切研發(fā)與當前流行株基因型一致的新型疫苗�；诖�,本研究對一株NDVHB株進行了全基因組測序,以此為基礎建立了HB株的反向遺傳操作平臺,并對其F蛋白進行改造,旨在為研發(fā)基因Ⅶ型NDV弱毒疫苗提供科學依據(jù)。從河北省某發(fā)病雞場的臨床樣本中檢測到一株新城疫病毒,命名為HB,采用RT-PCR方法對HB株的全基因組序列進行分段擴增,并對其基因序列進行結構特性分析及同源進化分析。結果表明HB株基因組全長為15192 bp,基因組3’端存在長為55 nt的引導序列,5’端存在長為114 nt的尾隨序列,主要編碼的6種結構蛋白,包括基質蛋白(M)、融合蛋白(F...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４輔助質粒構建示意圖??

同源序列；通??過別〇?Ｉ和１雙酶切ｐＣＩ－ｎｅｏ載體，然后利用同源重組技術將ＮＰ蛋白、Ｐ蛋白分別連接至??真核表達載體ｐＣ丨－ｎｅｏ中，因為Ｌ基因的ＯＲＦ長約６．７?ｋｂ，因此采用分段克隆方式，將Ｌ基因??分為２段擴增，分別命名為Ｌｌ、Ｌ２，再利用同源重組技術與ｐＣＩ－ｎｅｏ進....

圖３?ｐＣＩ－ｎｅｏ載體示意圖??Ｆｉｇ３?Ｔｈｅ?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｐＣＩ－ｎｅｏ?ｖｅｃｔｏｒ??

?基因ＶＩＩ型ＮＤＶ弱毒株感染性克隆的構建及病毒拯救???ａｇｉｎ??ｊＴ?ＣＭＶ?：?Ｐ，…???，＾ｙ?Ｅｎｈａｎｃｅｒ／Ｐｒｏｍｏｔｅｒ＾＾／?／?Ｕ?Ｊ．??／?／?／?／?Ｎｈｅｌ?ｔＧ６６??／／?Ｓ，，?ｊ｜??＾?ｗＷ＼?Ｂ?！ｉｌ??＼?（吻）?ｎ＼＾?！：Ｕ?....

圖５?ＰＯＫ１２載體改造策略??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ｓｔｒａｔｅｇｙ?ｏｆ?ｍｏｄｉｆｙ?Ｐ０ＫＩ２?ｖｅｃｔｏｒ??

ＡＡＡＡＴＡＴＣＡＴＣＴＣＴＧＡＡＣＡＡＣＡＴ?丁?ＧＣ－３’?３３３４??Ｌ２－Ｆ?５，－ＴＴＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＴＴＴＴＣＴＴＡＴＣＣＡＡＴＡＧＡＴＣＣＡＡＣＣＡＣＣＣ－３，??３４２９??Ｌ２－Ｒ?５，－ＣＡＴＧＴＣＴＧＣＴＣＧＡＡＧＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴＴＣＴＡＡＴＣＴＧ....

圖６內部基因構建策略??Ｆｉｇ．６?Ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｓｔｒａｔｅ＾?Ｉｎｔｅｒｎａｌ?ｇｅｎｅ??

進行測序，將測序正確的中間質粒保存?zhèn)溆谩??２．２．６內部基因的構建??將內部基因（ＮＰ、Ｐ和Ｌ基因）分為Ｆ３、Ｆ４和Ｆ５片段，在Ｈ片段的５’端通過引物引入??Ｔ７啟動子核苷酸序列和與載體連接的同源序列，３’端引入Ｆ４片段的同源序列；在？４片段的５＇??端引入Ｆ５片段的同源序列，....

本文編號：3929775