免疫系統(tǒng)是生物體抵抗外來微生物入侵的第一道防線,干擾素是免疫應(yīng)答過程中的重要效應(yīng)因子。Interferon-γ(IFN-y)屬于Ⅱ型干擾素,主要由活化的T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞產(chǎn)生,在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮重要作用,特別是對胞內(nèi)寄生菌的感染具有顯著抑制效果。microRNA(miRNA)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)且長度在18-25bp之間的非編碼RNA。近十年來,大量研究表明miRNA參與對機(jī)體免疫系統(tǒng)的調(diào)控,對維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)起著舉足輕重的作用。本研究選取重要的免疫細(xì)胞因子IFN-y作為研究對象,利用生物信息學(xué)方法和生物學(xué)實驗,對可能參與調(diào)控IFN-y表達(dá)的miRNA進(jìn)行了篩選和驗證,希望通過本研究能夠系統(tǒng)闡述miRNA對IFN-y表達(dá)多層次的調(diào)控機(jī)制,加深對miRNA調(diào)控IFN-y介導(dǎo)的免疫應(yīng)答過程中作用機(jī)制的認(rèn)識,同時為進(jìn)一步開發(fā)miRNA作為疾病診斷和治療的新靶標(biāo)提供理論依據(jù)。具體研究內(nèi)容包括以下幾個方面： 1.靶向IFN-y啟動子及其3’UTR的miRNA的預(yù)測 利用在線miRNA預(yù)測軟件Microinspector和TargetScan分別對IFN-y轉(zhuǎn)錄起始位點上游的11...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 干擾素
        1.1.1 IF-N-γ的產(chǎn)生
        1.1.2 IFN-γ的分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能
        1.1.3 IFN-γ的應(yīng)用及發(fā)展前景
    1.2 microRNA
        1.2.1 microRNA的生成
        1.2.2 microRNA的作用方式
        1.2.3 microRNA的表達(dá)調(diào)控
        1.2.4 microRNA的研究方法
        1.2.5 microRNA的應(yīng)用前景
第2章 目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 細(xì)胞系以及轉(zhuǎn)染相關(guān)材料
        3.1.3 載體構(gòu)建所用材料及獲贈載體
        3.1.4 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.5 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.2 靶點突變報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 雙熒光素酶報告系統(tǒng)
        3.2.4 miRNA mimics、inhibitors及超表達(dá)質(zhì)粒的電轉(zhuǎn)
        3.2.5 Real-Time PCR檢測IFN-γmRNA表達(dá)水平
        3.2.6 ELISA檢測IFN-γ蛋白表達(dá)水平
        3.2.7 熒光定量qRT-PCR檢測miRNA表達(dá)差異
        3.2.8 統(tǒng)計學(xué)方法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 IFN-γ啟動子及3’UTR報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.1 IFN-γ啟動子報告質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.1.2 IFN-γ 3’UTR報告質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.2 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA預(yù)測
    4.3 靶向IFN-γ啟動子的miRNA篩選
        4.3.1 IFN-γ轉(zhuǎn)錄起始位點上游1197bp片段啟動子活性的驗證
        4.3.2 靶向IFN-γ啟動子的miRNA的初步篩選
        4.3.3 miR-27a抑制IFN-γ啟動子活性的驗證
        4.3.4 miR-27a與IFN-γ啟動子作用靶點的驗證
    4.4 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA篩選
        4.4.1 靶向IFN-γ3’UTR的miRNA的初步篩選
        4.4.2 miR-27a結(jié)合IFN-γ3’UTR的驗證
        4.4.3 miR-27a與IFN-γ3’UTR作用靶點的驗證
    4.5 T細(xì)胞中miR-27a對IFN-γ表達(dá)的調(diào)控作用
        4.5.1 EL4細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件的優(yōu)化
        4.5.2 EL4細(xì)胞中IFN-γ表達(dá)的檢測
        4.5.3 EL4細(xì)胞中miR-27a對IFN-γ表達(dá)的調(diào)控作用
        4.5.4 EL4細(xì)胞中T-bet表達(dá)質(zhì)粒表達(dá)效率的檢測
    4.6 EL4細(xì)胞中IFN-γ的表達(dá)對miR-27a表達(dá)的影響
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA的預(yù)測
        5.1.2 靶向IFN-γ啟動子及靶向其3’UTR的miRNA的篩選與驗證
        5.1.3 miR-27a抑制IFN-γ表達(dá)
        5.1.4 表達(dá)量增加的IFN-γ對miR-27a表達(dá)的影響
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3910703