日本乙型腦炎(Japanese Encephalitis,JE)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的一種人畜共患病,簡稱乙腦。JEV是黃病毒屬的成員之一,主要通過庫蚊傳播。雖然JEV疫苗已廣泛使用,但迄今,其傳播范圍仍然在不斷擴大。為了研究JEV的致病機理并為日本乙型腦炎提供更好的治療方法,本研究以DC-SIGN(Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule-3-Grabbing Non-integrin,DC-SIGN)家族為切入點,以小鼠為感染模型,探究在JEV感染后DC-SIGN發(fā)揮的免疫功能�；谇捌赗NA測序結果,我們利用JEV P3強毒株和SA14-14-2疫苗株感染小鼠第3天的脾臟樣品,對DC-SIGN家族中表達有變化的3個成員DC-SIGN(CD209A)、DC-SIGNR1(CD209B)和DC-SIGNR2(CD209C)進行了驗證。相對于對照組小鼠,CD209A在P3感染小鼠脾臟中的CD11c⁺樹突狀細胞、F4-80

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
縮略語表(Abbreviation)
1 文獻綜述
    1.1 日本乙型腦炎簡介
    1.2 日本乙型腦炎的發(fā)現(xiàn)
    1.3 日本乙型腦炎的流行病學
        1.3.1 日本乙型腦炎的流行與分布
        1.3.2 日本乙型腦炎的傳播
    1.4 日本乙型腦炎的病原學特征
        1.4.1 日本乙型腦炎病毒的分子結構
        1.4.2 日本乙型腦炎病毒的復制
        1.4.3 日本乙型腦炎病毒的致病過程
    1.5 日本乙型腦炎的臨床癥狀及診斷
    1.6 日本乙型腦炎的防控及疫苗的研究進展
    1.7 日本乙型腦炎病毒感染引起的免疫應答
        1.7.1 先天性免疫應答
        1.7.2 適應性免疫應答
    1.8 樹突狀細胞在日本乙型腦炎病毒感染中的功能
        1.8.1 不同DCs亞群在日本乙型腦炎病毒感染中的功能
        1.8.2 DCs對日本乙型腦炎病毒的攝取、處理和提呈
        1.8.3 DCs培養(yǎng)及細胞系
    1.9 DC-SIGN分子在黃病毒感染中的功能
        1.9.1 DC-SIGN分子的發(fā)現(xiàn)
        1.9.2 DC-SIGN分子的表達及配體
        1.9.3 DC-SIGN分子在黃病毒感染中的功能
        1.9.4 DC-SIGN分子家族
2 目的與意義
3 材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 病毒、質粒、菌株、細胞系和實驗動物
        3.1.2 主要藥品和試劑
        3.1.3 培養(yǎng)基及其配制
        3.1.4 溶液及其配制
        3.1.5 實驗所用手術器械
        3.1.6 重要儀器及設備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 細胞的復蘇和培養(yǎng)
        3.2.2 JEV的擴增與毒價滴定
        3.2.3 JEV-P3和SA14-14-2感染C57BL/6小鼠
        3.2.4 小鼠脾臟單細胞懸液的制備
        3.2.5 細胞表面染色
        3.2.6 RNA的提取與DNA的去除
        3.2.7 反轉錄PCR
        3.2.8 熒光定量PCR
        3.2.9 BMDCs細胞的制備
        3.2.10常規(guī)分子克隆實驗
        3.2.11 脂質體轉染細胞的方法
        3.2.12 構建穩(wěn)定表達DC2.4細胞系
        3.2.13 相關引物的設計與合成
        3.2.14體外細胞共培養(yǎng)實驗
        3.2.15 熒光定量PCR檢測JEV拷貝數(shù)
        3.2.16 流式細胞術數(shù)據(jù)分析
        3.2.17 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        3.2.18 手術器械消毒
        3.2.19 實驗動物倫理聲明
        3.2.20 實驗動物及廢物無害化處理
4 結果與分析
    4.1 JEV-P3株和SA14-14-2株毒價的測定
    4.2 JEV感染對DC-SIGN分子家族表達的影響
        4.2.1 JEV感染對DC-SIGN分子家族表達的影響
        4.2.2 JEV感染對CD209A分子表達的影響
        4.2.3 JEV感染對CD209B分子表達的影響
        4.2.4 JEV感染對CD209C分子表達的影響
    4.3 CD209A、CD209B在小鼠骨髓來源樹突狀細胞上的表達
        4.3.1 小鼠骨髓來源樹突狀細胞的培養(yǎng)
        4.3.2 CD209A和CD209B在小鼠骨髓來源樹突狀細胞上的表達
    4.4 穩(wěn)定表達CD209A、CD209B的DC2.4細胞系的構建及鑒定
        4.4.1 穩(wěn)定表達CD209A的DC2.4細胞系的構建及鑒定
        4.4.2 穩(wěn)定表達CD209B的DC2.4細胞系的構建及鑒定
    4.5 CD209A、CD209B對JEV感染的影響
    4.6 CD209A、CD209B對T細胞增殖的影響
        4.6.1 JEV感染對EL-4細胞增殖的影響
        4.6.2 CD209A對EL-4細胞增殖的影響
        4.6.3 CD209B對EL-4細胞增殖的影響
5 討論
    5.1 JEV感染抑制CD209A的表達
    5.2 JEV感染促進CD209B的表達
    5.3 樹突狀細胞成熟狀態(tài)與CD209A、CD209B表達的關系
    5.4 CD209A促進JEV的復制
    5.5 CD209A、CD209B促進T細胞的增殖
6 結論
參考文獻
致謝



本文編號：3873189