目的共表達(dá)新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F蛋白與雞傳染性支氣管炎(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白,純化并分析其免疫原性。方法根據(jù)NCBI中NDV F及IBV S1片段基因序列,截取包含F(xiàn)及S1蛋白部分抗原表位基因片段,設(shè)計(jì)并合成引物,PCR擴(kuò)增目的片段,依次連接至原核表達(dá)載體pET-32a(+)上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-32a-F-S1,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),并對(duì)IPTG濃度和誘導(dǎo)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,SDS-PAGE分析目的蛋白可溶性;重組蛋白經(jīng)Ni-NTA agarose層析純化復(fù)性后,Western blot法檢測(cè)其反應(yīng)原性。將14日齡雛雞隨機(jī)分F-S1、NDV F、IBV S1及PBS組,肌內(nèi)免疫3輪,間隔10 d,每輪連續(xù)免疫5 d,每日1次,100μg/只,首次免疫后每隔7 d采集血清,ELISA法檢測(cè)雛雞血清特異性IgG水平。結(jié)果經(jīng)雙酶切鑒定,重組質(zhì)粒p ET-32a-F-S1構(gòu)建正確。重組蛋白最適IPTG誘導(dǎo)濃度為0. 2 mmol/L,時(shí)間為3 h;其以包...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、載體及菌株
    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及雞胚
    1.3 主要試劑
    1.4 引物設(shè)計(jì)及合成
    1.5 目的基因的擴(kuò)增及克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 pET-32a-F-S1重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.7 重組蛋白F-S1的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.8 表達(dá)產(chǎn)物可溶性分析
    1.9 重組蛋白的純化及復(fù)性
    1.1 0 純化重組蛋白的鑒定
    1.1 1 動(dòng)物分組及免疫
    1.1 2 雛雞血清IgG抗體水平的檢測(cè)
    1.1 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 目的基因的鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒pET-32a-F-S1的鑒定
    2.3 重組蛋白F-S1的最適誘導(dǎo)條件
    2.4 表達(dá)產(chǎn)物的可溶性
    2.5 純化重組蛋白的鑒定
    2.6 雛雞血清IgG抗體水平
3 討論



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