豬繁殖與呼吸綜合征是動(dòng)物二類傳染病,俗稱藍(lán)耳病,可通過個(gè)體接觸、污染物和空氣傳播。PRRS現(xiàn)已成為規(guī)�；B(yǎng)豬場(chǎng)的主要疫病之一,給世界養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。豬繁殖與呼吸綜合征病毒顆粒呈橢球體,由囊膜包裹,直徑在50⁷4 nm之間。根據(jù)病毒基因序列和抗原性等方面的差異,又將其分為基因Ⅰ型和基因Ⅱ型。PRRSV因其抑制先天性免疫應(yīng)答的能力,目前仍然是嚴(yán)重危脅養(yǎng)豬業(yè)安全的病原之一。研究表明,獲得性免疫應(yīng)答反應(yīng)在PRRSV感染的機(jī)體內(nèi)起著關(guān)鍵性的免疫保護(hù)作用,而PRRSV GP2蛋白不僅是病毒侵染宿主細(xì)胞的必要結(jié)構(gòu)蛋白,還能引起宿主產(chǎn)生明顯的獲得性免疫應(yīng)答。本研究通過合成GP2蛋白的重疊多肽,采用間接ELISA和IFN-γELISPOT的方法篩選并得到了GP2蛋白3個(gè)B細(xì)胞表位和6個(gè)T細(xì)胞表位,為新型表位疫苗的研究提供幫助。將實(shí)驗(yàn)室保存的PRRSV JXA1-R毒株進(jìn)行擴(kuò)增,根據(jù)Reed-Muench兩氏法測(cè)定其病毒滴度為10⁶.6.6 TCID₅₀/mL。提取JXA1-R毒株總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板擴(kuò)...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 PRRSV的危害
    1.2 PRRSV的分子病原學(xué)
        1.2.1 形態(tài)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)
        1.2.2 PRRSV的基因組構(gòu)成
        1.2.3 PRRSV的主要結(jié)構(gòu)蛋白
        1.2.4 PRRSV的次要囊膜蛋白
    1.3 PRRSV的流行病學(xué)概述
        1.3.1 PRRSV的傳播途徑
        1.3.2 PRRSV的宿主特異性
        1.3.3 PRRSV的感染特征
    1.4 PRRSV感染誘導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)
        1.4.1 體液免疫
        1.4.2 細(xì)胞免疫
    1.5 PRRS的防控及診斷
        1.5.1 PRRS的防控
        1.5.2 PRRS的診斷
    1.6 抗原表位研究進(jìn)展
        1.6.1 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白T細(xì)胞表位研究現(xiàn)狀
        1.6.2 PRRSV結(jié)構(gòu)蛋白B細(xì)胞表位研究現(xiàn)狀
    1.7 研究目的及意義
2 PRRSVGP2蛋白基因擴(kuò)增及原核表達(dá)
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 病毒株、載體、菌株和細(xì)胞
        2.1.2 試驗(yàn)試劑及試劑盒
        2.1.3 主要試驗(yàn)儀器與耗材
        2.1.4 試劑配制方法
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 PRRSVJXA1-R毒株擴(kuò)繁
        2.2.2 病毒感染力測(cè)定
        2.2.3 ORF2目的基因獲取
        2.2.4 克隆載體構(gòu)建并回收測(cè)序
        2.2.5 GP2蛋白原核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.6 GP2蛋白的表達(dá)純化與鑒定
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 病毒感染力測(cè)定
        2.3.2 ORF2目的基因獲取
        2.3.3 ORF2克隆載體鑒定并測(cè)序
        2.3.4 GP2蛋白表達(dá)載體構(gòu)建
        2.3.5 GP2蛋白的表達(dá)純化及WesternBlot鑒定
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 PRRSVGP2蛋白B細(xì)胞、T細(xì)胞表位篩選
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 病毒株和試驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 試驗(yàn)試劑及試劑盒
        3.1.3 主要試驗(yàn)儀器與耗材
        3.1.4 試劑配制方法
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 試驗(yàn)豬PRRSV抗體檢測(cè)
        3.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物免疫
        3.2.3 分離血清樣品與外周血單核細(xì)胞
        3.2.4 GP2蛋白抗體檢測(cè)
        3.2.5 GP2蛋白重疊多肽設(shè)計(jì)
        3.2.6 GP2蛋白B細(xì)胞表位篩選
        3.2.7 B細(xì)胞表位保守性分析
        3.2.8 GP2蛋白T細(xì)胞表位篩選
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 試驗(yàn)豬PRRSV抗體檢測(cè)
        3.3.2 GP2蛋白抗體水平檢測(cè)
        3.3.3 GP2蛋白重疊多肽合成
        3.3.4 GP2蛋白B細(xì)胞表位篩選
        3.3.5 B細(xì)胞表位保守性分析
        3.3.6 GP2蛋白T細(xì)胞表位篩選
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 英文縮略詞表
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3823394