研究在利用世界動物衛(wèi)生組織(OIE)推薦的TaqMan熒光定量PCR方法基礎(chǔ)上,增加內(nèi)標(biāo)物TaqMan熒光,通過優(yōu)化反應(yīng)體系及條件,進行Real-time PCR擴增,建立了一種快速、準(zhǔn)確、特異性好的非洲豬瘟病毒核酸雙重TaqMan探針熒光定量PCR技術(shù),并進行敏感性、穩(wěn)定性和特異性評價及比較。結(jié)果顯示:熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,R²值可達(dá)到1,敏感性最低能檢測到28個拷貝數(shù)/μL,比常規(guī)PCR方法高40～80倍;通過5份標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒重復(fù)檢測3次,每一個樣品重復(fù)檢測Ct值一致,穩(wěn)定性良好,變異系數(shù)范圍0.70%～2.51%;同時每一個樣品反應(yīng)體系中內(nèi)標(biāo)物(pUC57-actin)Ct值一致,變異系數(shù)范圍0.25%～3.44%,因此雙重驗證了該方法的穩(wěn)定性;特異性試驗證明與豬瘟病毒(CSFV)、豬圓環(huán)病毒(PCV2)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬細(xì)小病毒(PPV)基因組無交叉反應(yīng)。該方法具有提升準(zhǔn)確率和判斷監(jiān)測體系內(nèi)是否存在干擾物的優(yōu)點,可以防止樣品出現(xiàn)假陰性;適合于血清樣品、組織樣品和疫苗樣品的非洲豬瘟病毒核酸檢測。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗試劑
    1.2 試驗儀器
    1.3 病毒
    1.4 非洲豬瘟病毒陽性質(zhì)粒合成和引物合成
    1.5 內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒合成和引物合成
    1.6 雙重Taq Man實時熒光定量PCR體系的建立與優(yōu)化
    1.7 雙重Taq Man實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    1.8 雙重Taq Man實時熒光定量PCR敏感性試驗、特異性試驗、穩(wěn)定性試驗
        1.8.1 特異性試驗
        1.8.2 敏感性試驗
        1.8.3 穩(wěn)定性試驗
2 結(jié)果與分析
    2.1 雙重Taq Man實時熒光定量PCR體系的建立與優(yōu)化
    2.2 雙重Taq Man實時熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.3 雙重Taq Man實時熒光定量PCR特異性試驗、敏感性試驗和穩(wěn)定性試驗
        2.3.1 特異性試驗
        2.3.2 敏感性試驗
        2.3.3 穩(wěn)定性試驗
3 討論
4 結(jié)論



本文編號：3791443