發(fā)布時間：2023-04-11 19:27

　　不同泌乳時期水(奶)牛外周血白細胞牛全基因組表達譜芯片的數(shù)據(jù)分析表明,牛泌乳前期到中期、中期到后期有多個基因的表達量呈現(xiàn)2倍的上調(diào)或下調(diào),其中ISG15和IL8均呈現(xiàn)泌乳前期到中期的表達下降,然后中期到后期的表達上升這樣一種趨勢。鑒于ISG15和IL8在先天性免疫和獲得性免疫中的重要作用,我們將ISG15和IL8基因作為牛疾病抗性的重要候選基因,利用cDNA末端快速擴增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)技術(shù)克隆溫州水牛1SG15和IL8基因全長序列,分別設(shè)計覆蓋牛ISG15和IL8基因的聚合酶鏈式反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism, PCR-SSCP)引物,對比了中國荷斯坦牛、溫嶺高峰牛、天臺黃牛、魯西黃牛和溫州水牛1L8基因的單核苷酸多態(tài)性,中國荷斯坦牛、魯西黃牛和溫州水牛ISG15基因的單核苷酸多態(tài)性,并進行了這些單核苷酸多態(tài)性與泌乳性狀的關(guān)聯(lián)分析,為提高�？共⌒阅芎透纳泼谌樾阅芴峁├碚摶A(chǔ)。 1溫州水牛1SG15基因克隆...

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫說明
第一章 文獻綜述
    1. 試驗品種概況
        1.1 溫州水牛
        1.2 中國荷斯坦牛
        1.3 魯西黃牛
        1.4 溫嶺高峰牛
        1.5 天臺黃牛
    2 奶牛產(chǎn)奶性狀與乳房炎
    3 干擾素刺激基因ISG15(IFN-STIMULATED GENE 15,ISG15)
        3.1 ISG15與病毒、細菌及寄生蟲感染
        3.2 ISG15與腫瘤
        3.3 ISG15與母體妊娠
    4 白細胞介素-8(INTERLEUKIN-8,IL8)
        4.1 IL8與感染和炎癥反應(yīng)
        4.3 IL8與脂質(zhì)代謝
        4.4 IL8與疾病
    5. 研究目的及意義
第二章 溫州水牛ISG15基因克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料與采樣方法
        1.2 牛外周血白細胞總RNA的提取與純化
        1.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        1.4 溫州水牛ISG15基因克隆引物的設(shè)計
        1.5 應(yīng)用RACE技術(shù)擴增溫州水牛ISG15基因
        1.6 牛ISG15基因(含3'和5’側(cè)翼區(qū))DNA序列的克隆
        1.7 目的片段的純化、克隆和測序
        1.8 溫州水牛ISG15 MRNA序列拼接及反芻動物ISG15基因MRNA序列的多重比對
        1.9 哺乳動物ISG15 DNA序列的多重比對
        1.10 哺乳動物ISG15蛋白序列的多重比對及溫州水牛ISG15蛋白的生物信息學分析
    2 結(jié)果
        2.1 溫州水牛ISG15基因克隆
        2.2 溫州水牛ISG15序列拼接及ORF分析
        2.3 反芻動物ISG15基因的多重比較
        2.4 溫州水牛ISG15蛋白序列與生物信息學分析
        2.5 哺乳動物ISG15蛋白的多重比較
        2.6 溫州水牛ISG15蛋白功能分析
    3 討論
        3.1 ISG15蛋白功能域分析
        3.2 哺乳動物ISG15蛋白的成熟
        3.3 ISG15蛋白的信號肽
第三章 溫州水牛IL8基因克隆與序列分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料與采樣方法
        1.2 牛外周血總RNA的提取
        1.3 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        1.4 溫州水牛IL8基因克隆引物的設(shè)計
        1.5 應(yīng)用RACE技術(shù)擴增溫州水牛IL8基因
        1.6 牛IL8基因(含3'和5'側(cè)翼區(qū))DNA序列的克隆
        1.7 目的片段的純化、克隆和測序
        1.8 溫州水牛IL8 MRNA序列拼接及反芻動物IL8基因MRNA序列的多重比對
        1.9 哺乳動物IL8 DNA序列的多重比對
        1.10 哺乳動物IL8蛋白序列的多重比對及溫州水牛IL8蛋白的生物信息學分析
    2 結(jié)果
        2.1 溫州水牛IL8基因克隆
        2.2 溫州水牛IL8序列拼接及ORF分析
        2.3 反芻動物IL8基因的多重比對
        2.4 溫州水牛IL8蛋白序列與生物信息學分析
        2.5 哺乳動物IL8蛋白的多重比對
        2.6 溫州水牛IL8蛋白功能分析
    3 討論
        3.1 溫州水牛IL8 MRNA不穩(wěn)定基序
        3.2 IL8的蛋白分析
            3.2.1 IL8與信號肽
            3.2.2 IL8蛋白功能域分析
        3.3 IL8與乳房炎
第四章 牛ISG15基因單核苷酸多態(tài)性及其與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物及采樣方法
        1.2 DNA提取
        1.3 溫州水牛和中國荷斯坦牛ISG15基因的PCR擴增及檢測
        1.4 PCR-SSCP分析
        1.5 PCR產(chǎn)物的純化、回收及測序
        1.6 序列分析
        1.7 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 牛ISG15基因PCR-SSCP引物設(shè)計及PCR擴增
        2.2 牛ISG15基因PCR-SSCP檢測與突變區(qū)域測序
        2.3 牛ISG15基因SNPs的群體遺傳學分析
        2.4 牛ISG15基因SNPs對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的影響
        2.5 ISG15基因SNPs與中國荷斯坦牛泌乳性狀的關(guān)聯(lián)分析
    3 討論
        3.1 ISG15基因SNPs對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的影響
        3.2 牛ISGl5基因突變
第五章 牛IL8基因單核苷酸多態(tài)性及其與中國荷斯坦奶產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物及采樣方法
        1.2 DNA提取
        1.3 溫州水牛和中國荷斯坦牛IL8基因的PCR擴增及檢測
        1.4 PCR-SSCP分析
        1.5 PCR產(chǎn)物的純化回收及克隆及測序
        1.6 序列分析
        1.7 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 中國荷斯坦牛和溫州水牛IL8基因PCR-SSCP引物設(shè)計及PCR擴增
        2.2 溫州水牛IL8基因PCR-SSCP檢測
        2.3 中國荷斯坦牛、天臺黃牛、溫嶺高峰牛IL8基因PCR-SSCP檢測及測序(含魯西黃牛)
        2.4 中國荷斯坦牛IL8基因SNPs對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的影響
        2.5 牛IL8基因SNPs的群體遺傳學分析
        2.6 IL8基因內(nèi)的SNPs與中國荷斯坦牛乳質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析
    3 討論
        3.1 牛IL8基因突變分析
        3.2 IL8基因內(nèi)的SNP對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點的影響
第六章 全文結(jié)論
參考文獻
附錄1 反芻動物ISG15基因MRNA的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄2 哺乳動物ISG15蛋白的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄3 反芻動物IL8基因MRNA的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄4 哺乳動物IL8蛋白的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄5 溫州水牛ISG15基因與反芻動物標準序列的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄6 溫州水牛IL8基因與反芻動物標準序列的多重比對(CLUSTALX 1.83)
附錄7 溫州水牛ISG15基因內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預測
附錄8 中國荷斯坦奶牛IL8基因(NC₀00163)內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預測
致謝
攻讀學位期間取得的研究成果



本文編號：3789614