兔出血癥(Rabbit hemorrhagic disease, RHD)是由兔出血癥病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起的一種以全身實(shí)質(zhì)器官出血為主要特征的急性、敗血性、高度接觸傳染性、致死性的兔病。RHDV屬杯狀病毒科兔病毒屬,無(wú)囊膜,為20面體對(duì)稱結(jié)構(gòu),直徑40 nm,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。RHDV僅有一個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白VP60,可自我組裝成病毒樣顆粒(virus-like particles, VLPs).有研究證實(shí)這種病毒樣顆粒也可嵌合表達(dá)外源基因,或作為疫苗載體。為探究兔出血癥病毒樣顆粒(VP60-VLPs)是否有作為外源表位載體的能力,本文利用雙串聯(lián)的OVA257-264CD8+T細(xì)胞表位(序列為SIINFEKL,以柔性氨基酸GS連接)對(duì)RHDV VP60的不同位點(diǎn)進(jìn)行插入和取代,研究其對(duì)嵌合蛋白的表達(dá)和病毒樣顆粒組裝的影響,并通過(guò)電鏡觀察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),研究VP60 VLPs作為外源片段展示載體的可行性和耐受性。實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：1.重組穿梭載體的構(gòu)建 通過(guò)運(yùn)用基因克隆和重組技術(shù)將雙串聯(lián)OVA CD8+T細(xì)胞表位(GSSIINFEKLGSS...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表(Abbreviation)
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    1 兔出血癥病毒
        1.1 RHD的發(fā)病史
        1.2 RHDV的分類
        1.3 RHDV病原
        1.4 臨床癥狀和病理變化
        1.5 RHDV的流行病學(xué)
        1.6 預(yù)防,控制和預(yù)防接種
        1.7 RHDV的治療應(yīng)用
        1.8 小結(jié)
    2 病毒樣顆粒
        2.1 病毒樣顆粒的起源
        2.2 病毒樣顆粒的特點(diǎn)
        2.3 病毒樣顆粒的表達(dá)系統(tǒng)
        2.4 嵌合VLPs的產(chǎn)生
        2.5 VLPs疫苗的生產(chǎn)應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)部分
    第一章 三種攜帶雙串聯(lián)OVA T細(xì)胞表位的重組穿梭載體的構(gòu)建
        1 材料與方法
            1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞、菌種
            1.2 主要試劑與工具酶
            1.3 核酸序列分析
            1.4 引物設(shè)計(jì)
            1.5 構(gòu)建示意圖
            1.6 目的片段的構(gòu)建
            1.7 穿梭載體Bacmid的構(gòu)建
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.1 目的基因的構(gòu)建
            2.2 重組表達(dá)載體的酶切鑒定
            2.3 目的基因pFastBac1-DC的構(gòu)建
            2.4 重組質(zhì)粒的酶切鑒定
            2.5 重組穿梭載體鑒定
        3 討論
            3.1 SOE技術(shù)
            3.2 外源表位插入位置的選擇
        參考文獻(xiàn)
    第二章 三種嵌合蛋白的表達(dá)及鑒定
        1 材料與方法
            1.1 質(zhì)粒、菌株與細(xì)胞
            1.2 主要試劑與工具酶
            1.3 重組穿梭載體轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞
            1.4 重組桿狀病毒的初步鑒定
            1.5 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
        2 結(jié)果
            2.1 轉(zhuǎn)染
            2.2 RT-PCR鑒定重組病毒的mRNA
            2.3 血凝實(shí)驗(yàn)
            2.4 免疫熒光
            2.5 重組蛋白的表達(dá)及免疫印跡鑒定
        3 討論
            3.1 嵌合蛋白載體和外源表位的表達(dá)
            3.2 表達(dá)系統(tǒng)的選擇
            3.3 嵌合蛋白的血凝特性
        參考文獻(xiàn)
    第三章 嵌合蛋白的自聚能力和免疫原性研究
        1 材料與方法
            1.1 試劑、培養(yǎng)基和病毒
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.3 病毒樣顆粒的電鏡觀察
            1.4 嵌合蛋白免疫原性的研究
        2 結(jié)果
            2.1 電鏡觀察
            2.2 嵌合蛋白載體特異性抗體效價(jià)的測(cè)定
            2.3 ELISPOT檢測(cè)特異性IFN-γ分泌
        3 討論
            3.1 病毒樣顆粒的形成
            3.2 免疫原性的研究
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3738931