雞球蟲病是一種由艾美爾球蟲引起的腸道疾病,嚴重影響?zhàn)B禽業(yè)的經濟效益,傳統(tǒng)的化學藥物防治導致食物中藥物殘留,威脅著人類的健康。目前應用的球蟲活疫苗存在毒力返強等問題,因此需要一種新型穩(wěn)定高效的替代方法來控制雞球蟲病。雞球蟲子孢子通過其表面蛋白來識別、黏附并入侵腸黏膜上皮細胞,宿主菌—乳酸菌表達的目的蛋白與入侵的子孢子表面蛋白相似,同時可激發(fā)有效保護性免疫應答。乳酸菌作為抗原傳遞載體已成為疫苗研宄的熱點之一 本研究應用L.lactis NZ9000作為宿主菌,將E.tenella子孢子3-1E基因克隆入大腸桿菌-乳酸菌穿梭表達載體pTX8048中,篩選獲得陽性質粒pTX8048-3-1E。將陽性質粒pTX8048-3-1E電轉化入￡.lactis NZ9000感受態(tài)細胞,經篩選獲得重組陽性菌L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E,重組菌經5ng/mL Nisin誘導后,采用Western blot檢測目的蛋白的表達。將誘導后1×101。CFU L.lactis NZ9000-pTX8048-3-1E分別于5,6,7、15,16,17、25,26,27曰齡三次口服免疫... 

【文章頁數】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 雞艾美爾球蟲病概述
        1.1.1 雞球蟲病對養(yǎng)禽業(yè)危害
        1.1.2 雞球蟲臨床癥狀
        1.1.3 雞艾美爾球蟲生命周期
    1.2 雞艾美爾球蟲入侵宿主細胞
        1.2.1 微線蛋白
        1.2.2 頂膜抗原
        1.2.3 棒狀蛋白
        1.2.4 球蟲表面蛋白
        1.2.5 3-1 E基因
    1.3 宿主抗球蟲免疫應答
    1.4 雞球蟲疫苗研究進展
        1.4.1 雞球蟲活疫苗
        1.4.2 雞球蟲重組疫苗
    1.5 乳酸菌作為疫苗載體的研究進展
        1.5.1 乳酸菌與黏膜免疫
        1.5.2 乳酸菌作為表達載體的優(yōu)勢
        1.5.3 乳酸菌表達方式
        1.5.4 乳酸鏈球菌素及其表達系統(tǒng)
    1.6 Toll樣受體2相關研究進展
    1.7 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株及質粒
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要試驗儀器設備
        2.1.4 試驗動物與蟲種
    2.2 試驗方法
        2.2.1 雞E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的誘導表達
        2.2.2 試驗動物分組及取材
        2.2.3 重組乳酸菌免疫保護效果的評估
        2.2.4 脾臟T淋巴細胞增殖試驗
        2.2.5 脾臟中IL-2與IFN-Y mRNA表達量檢測
        2.2.6 ChTLR2信號通路中相關分子QRT-PCR方法的建立
        2.2.7 ChTLR2及其信號通路中三種相關分子inRNA相對表達量的檢測
        2.2.8 數據統(tǒng)計與分析
3 試驗結果
    3.1 E.tenella 3-1E基因在乳酸菌中的誘導表達
        3.1.1 E.tenella 3-1E基因的亞克隆
        3.1.2 pTX8048-3-1E載體構建與鑒定
        3.1.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E篩選鑒定
        3.1.4 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E表達蛋白的Western blot鑒定
    3.2 乳酸菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫效果的評估
        3.2.1 體重增重變化
        3.2.2 感染后盲腸病變計分
        3.2.3 卵囊排出減少率
        3.2.4 抗球蟲指數ACI
    3.3 重組菌L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫保護機制
        3.3.1 脾臟T淋巴細胞增殖功能變化
        3.3.2 脾臟IL-2、IFN-γ mRNA表達變化
        3.3.3 ChTLR2信號通路中相關分子QRT-PCR方法的建立
        3.3.4 脾臟ChTLR2信號通路相關分子的mRNA表達變化
4 討論
    4.1 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的構建與表達
    4.2 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E的免疫保護作用
    4.3 L.lactis NZ9000 pTX8048-3-1E免疫后脾臟T淋巴細胞增殖變化
    4.4 脾臟TLR2信號通路相關分子mRNA表達變化
    4.5 脾臟IL-2、IFN-γ變化mRNA表達變化
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]雞球蟲EtMIC4-N重組蛋白AbISCO-100疫苗免疫效果[J]. 周賽,王黎霞,張瑩,劉新月,張成坤,張建軍,安健.  北京農學院學報. 2013(03)
[2]抗柔嫩艾美耳球蟲ScFv-PE40重組毒素的活性測定[J]. 郝景鋒,吳斌,蔡華東,趙權.  中國獸醫(yī)雜志. 2013(03)
[3]口服疫苗抗原遞送載體Lactococcus lactis NZ9000研究進展[J]. 任大勇,李昌,秦艷青,郭歡歡,杜壽文,劉宏鋒,高楠,金寧一.  中國獸藥雜志. 2012(06)
[4]頂復門原蟲入侵相關因子的研究進展[J]. 戚南山,孫銘飛,廖申權,吳彩艷,呂敏娜,袁建豐,余勁術,李祥瑞,蔡建平.  畜牧獸醫(yī)學報. 2012(02)
[5]雞柔嫩艾美耳球蟲3-1E真核重組表達質粒的構建及其免疫保護性分析[J]. 扈炳新,韓彩霞,李曉云,宋銘忻.  中國預防獸醫(yī)學報. 2011(11)
[6]柔嫩艾美耳球蟲楊凌株RB1-a基因的克隆表達及免疫保護性研究[J]. 彭維剛,黃妮,林青,胡冰,張三東,于三科.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2011(12)
[7]雞柔嫩艾美耳球蟲3-1E和CDPK雙抗原DNA疫苗的免疫保護效果觀察[J]. 徐守振,汪明.  中國獸醫(yī)雜志. 2011(09)
[8]堆型艾美耳球蟲pcDNA3-3-1E重組表達質粒的免疫保護性[J]. 趙月蘭,王建永,盧軍霞,包永占,秦建華.  中國獸醫(yī)學報. 2011(08)
[9]細胞因子在抗雞球蟲感染中的作用及應用[J]. 潘虹,舒麗,侯杰,林瑞慶,翁亞彪.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(07)
[10]Ea3-1E與mChIL-15融合基因的構建及其真核表達質粒的免疫效果[J]. 馬德星,潘龍,楊靜紅,唐麗,李廣興.  中國獸醫(yī)科學. 2010(09)

博士論文
[1]雞IL-18堆型艾美耳球蟲3-1E-α-tubulin增強型核酸疫苗免疫保護機理[D]. 黃小丹.東北農業(yè)大學 2012



本文編號：3718861