自2016年5月以來(lái),安徽、江蘇、山東、云南、四川等養(yǎng)鵝場(chǎng)爆發(fā)一種以痛風(fēng)為主要病癥的傳染病,該病表現(xiàn)為腿關(guān)節(jié)腔充滿白色漿液及腎臟尿酸鹽沉積導(dǎo)致腎炎,5-19日齡雛鵝易感,死亡率高達(dá)30%,給養(yǎng)鵝業(yè)及相關(guān)產(chǎn)業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。本研究首先對(duì)實(shí)驗(yàn)室對(duì)2016-2019年從各地采集的RT-PCR鵝星狀病毒（Goose Astroviruses,GoAstV）陽(yáng)性臨床發(fā)病鵝樣品,進(jìn)行回顧性分析,對(duì)其中有時(shí)間和地區(qū)代表性毒株的ORF1b（編碼RNA依賴性RNA聚合酶蛋白）,ORF2（編碼病毒衣殼蛋白）基因序列比對(duì)分析。結(jié)果表明,樣本LA1605,ZJ1703,ZJ1704,ADY1708,LY1912與中國(guó)現(xiàn)已發(fā)表的多株鵝星狀病毒基因序列同源性高達(dá)99.9%。構(gòu)建GoAstV Cap原核表達(dá)載體pET-30a-rCap,轉(zhuǎn)化BL21（DE3）后使用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE和Western blot檢測(cè)蛋白的表達(dá),大量表達(dá)并純化帶有His標(biāo)簽的rCap重組蛋白,獲得濃度為0.74 mg/mL的重組蛋白。將純化的蛋白作為免疫原免疫BALB/c小鼠,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme li... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

星狀病毒基因組結(jié)構(gòu)及衣殼蛋白結(jié)構(gòu)模式圖(Cortezetal.,2017)

圖 2.1 GoAstV ORF1b 基因的 PCR 擴(kuò)增結(jié)果 M：Trans 2KTM PlusⅡ DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子量；1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 毒株 ORF1b 片段；11：陰性對(duì)照 Fig.2.1 Amplification of GAstV ORF1b gene Lane M：Trans 2KTM Plus Ⅱ DNA marker； Lane 1-10：LA1605，ZJ1701，ZJ1702，ZJ1703，ZJ1704，ZJ1705，ADY1708，CZ1712，CX1801，LY1912 poison ORF1b gene；11：negative control

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 鵝星狀病毒流行病學(xué)調(diào)查及遺傳進(jìn)化分析 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.3.1 樣本 PCR 檢測(cè)結(jié)果 樣品分別為來(lái)自 2016 年 5 月至 2019 年 12 月期間安徽等地區(qū)各養(yǎng)殖場(chǎng)，共有 10 份患病鵝組織樣本。對(duì)上述樣本提取 RNA 進(jìn)行 GoAstV PCR 檢測(cè)，PCR 結(jié)果顯示 10 份樣品全部為陽(yáng)性，PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖如下所示（圖 2.1，圖 2.2）。

【參考文獻(xiàn)】：
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