試驗(yàn)旨在通過(guò)反向遺傳學(xué)技術(shù)構(gòu)建EgM123基因重組狂犬病病毒SRV₉疫苗株,為中國(guó)農(nóng)牧區(qū)的狂犬病和包蟲(chóng)病的有效防控提供技術(shù)手段。本試驗(yàn)參照狂犬病病毒SRV₉株全基因組序列,利用基因合成技術(shù)分別合成狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)蛋白N、P、L基因,以及N-P-M基因融合片段和狂犬病病毒G基因、細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)EgM123基因與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白eGFP融合片段基因,通過(guò)載體酶切插入連接方法,依次將狂犬病病毒L基因、N-P-M基因融合片段和G+EgM123+eGFP基因融合片段重組于pcDNA3.1（-）表達(dá)載體上,構(gòu)建EgM123基因重組狂犬病病毒SRV₉全長(zhǎng)cDNA。將合成的基因分別構(gòu)建于pcDNA3.1（-）表達(dá)載體,經(jīng)轉(zhuǎn)化、質(zhì)粒酶切、基因測(cè)序鑒定結(jié)果表明,狂犬病病毒N、P、L、N+P+M和G+EgM123+eGFP基因片段長(zhǎng)度分別為1 365、1 107、6 471、3 160和3 256 bp;EgM123基因重組狂犬病病毒全長(zhǎng)cDNA片段長(zhǎng)度為12 465 bp,各基因片段測(cè)序結(jié)果為100%。本試驗(yàn)成功構(gòu)建了EgM123基因重組狂... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(10)北大核心

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狂犬病病毒SRV9株N基因PCR鑒定

狂犬病病毒SRV9株N基因重組質(zhì)粒酶切鑒定

通過(guò)基因合成狂犬病SRV9病毒P基因序列1 107 bp,并在P基因序列兩端加入XhoⅠ/EcoR Ⅰ酶切位點(diǎn),經(jīng)菌液PCR方法和XhoⅠ/EcoRⅠ雙酶切方法,分別對(duì)基因合成狂犬病病毒SRV9株pcDNA3.1-P重組質(zhì)粒進(jìn)行序列鑒定。菌液PCR基因擴(kuò)增結(jié)果和雙酶切結(jié)果均獲得1 107 bp目的基因條帶(圖3、4),條帶大小與預(yù)期相符。所鑒定的重組質(zhì)粒經(jīng)基因序列測(cè)序,基因相似率為100%。圖4 狂犬病病毒SRV9株P(guān)基因質(zhì)粒酶切鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)EgM123重組恥垢分枝桿菌疫苗在小鼠體內(nèi)的表達(dá)及其免疫應(yīng)答[J]. 何黎,齊文靜,鄭雪婷,郭剛,李軍,張文寶.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2018(12)
[2]牛羊棘球蚴病(包蟲(chóng)病)防控策略[J]. 楊保平.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2018(06)
[3]細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)EgM123基因序列分析及EgM家族基因在蟲(chóng)體不同發(fā)育階段的差異表達(dá)分析[J]. 毛麗萍,王正榮,王偉,魏玉圓,翟少華,甘尚權(quán),簡(jiǎn)子健.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(10)
[4]細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)相關(guān)基因EgM123的克隆、表達(dá)及鑒定[J]. 王慧,齊文靜,何黎,郭寶平,張文寶,李軍.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2017(01)
[5]新疆基層醫(yī)院包蟲(chóng)病住院患者直接經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)分析[J]. 段新宇,魏晶晶,王樂(lè),陳新華,溫浩.  實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué). 2015(10)
[6]中西藥聯(lián)合阿苯達(dá)唑治療棘球蚴病研究進(jìn)展[J]. 張宏偉,彭心宇.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2009(09)



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