龔地弓形蟲(chóng)（Toxoplasma gondii）是重要的寄生原蟲(chóng)。脂類(lèi)代謝對(duì)弓形蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育極為重要。已知生物細(xì)胞的長(zhǎng)鏈�；o酶A可通過(guò)�；o酶A結(jié)合蛋白（acyl-CoA binding protein,ACBP）和甾醇載體蛋白（sterol carrier protein 2,SCP2）轉(zhuǎn)運(yùn)到不同細(xì)胞器參與脂類(lèi)合成。我們通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)發(fā)現(xiàn)弓形蟲(chóng)存在兩種酰基輔酶A結(jié)合蛋白,TgACBP1和TgACBP2,也具有甾醇載體蛋白TgSCP2,但未見(jiàn)對(duì)弓形蟲(chóng)ACBPs和SCP2的功能和作用機(jī)制的研究報(bào)道。首先我們證實(shí)了弓形蟲(chóng)體內(nèi)存在ACBP1和ACBP2。通過(guò)構(gòu)建內(nèi)源性標(biāo)記蟲(chóng)株,發(fā)現(xiàn)ACBP1分布于胞漿;胞內(nèi)和胞外蟲(chóng)體的ACBP2的定位存在差異,分別定位于線粒體和蟲(chóng)體外膜。胞內(nèi)蟲(chóng)體的ACBP2處于去磷酸化狀態(tài),胞外蟲(chóng)體的ACBP2處于磷酸化狀態(tài),高濃度[K+]和低濃度[Ca2+]條件下胞外蟲(chóng)體ACBP2發(fā)生去磷酸化;高濃度[K+]條件下胞外蟲(chóng)體ACBP2發(fā)生轉(zhuǎn)位。胞外酶活實(shí)驗(yàn)顯示ACBP1和ACBP2重組蛋白均能夠結(jié)合NBD-C16:0-CoA,利用酵母回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)TgACBP1和TgACB... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：145 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖３．１－１?ＴｇＡＣＢＰ２內(nèi)源性標(biāo)記蟲(chóng)株的構(gòu)建??

圖３．２－３?ＴｇＡＣＢＰＩ和ＴｇＡＣＢＰ２的結(jié)構(gòu)域分析??色表示�；o酶Ａ結(jié)合結(jié)構(gòu)域，橙色表示信號(hào)肽，綠色表示錨蛋白重復(fù)序Ｆｉｇ?３．２－３?Ｄｏｍａｉｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰＩ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??ｒｅｓｅｎｔｓ?ＡＣＢＤ，?ｏｒａｎｇｅ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎａｌ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ａｎｄ?ｇｒｅｅｎ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?結(jié)構(gòu)在線預(yù)測(cè)軟件ＰＳＩＰＲＥＤ，進(jìn)一步分析ＴｇＡＣＢＰ?１，發(fā)現(xiàn)ＡＣＢＤ結(jié)構(gòu)域均含有４個(gè)ａ螺旋簇（圖３．２－４）。??ＴｇＡＣＢＰＩ?Ｂ．?ＴｇＡＣＢＰ２??ＵＩＩＩｉｎｉｌｌｌｌ９３ｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉａａａ３．〇｛?ｃ〇ｎｆ?）ａ３ａａａｎ３９ｉａａＢｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌ３３３ｌｌｌｌ＿＾?＞?〇?■?￣ｖ－?ＩＤ?ＧＣＣＨＫＨＨＫＨＨＨＨＭＨＨ＞：ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＨＨＨｈＨＨＨＨＨＨＨＣＣ?Ｐ?＊?：??ＡＳＱＥＥＦＥＲＡＡＫＹＶａＴＳＧＫ￡ＳＧＬＮＰＴＴＥ〇ＫＬＥＦＹＫＹＹＫ〇Ａ?ＡＡ?：?ＳＵＬＬＦｗＨＣＰＶ?Ｘ?ＥＩ?ＴＴＤＤＶＥＧＧＰＴＣＫＬＰＫ?．?ＦＮＥ１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０３ｌｌｉｍｍｉｉ３３３３３３３ｌｌｌ９ａ３ｌｌｌｌｉｎｉｌｌｌｌｌｉ?Ｃｏｎ（?：?：｜｜｜｜｜３３３３３３｜？｜８１１８３３３｜｜｜｜｜｜｜９３９９＾?＾???Ｐｒ費(fèi)ｄｓ??ｆｌ?）?“??ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨｈＨ．－ｉｈｎｈＨＣＣＣＣＣｈＨＨｈＨＨＨＨＨ?Ｆｚｔ－＾?：?ＣＣＣＣＣＪＣＣＣＨＨＨＭＭＨＨＭＨＭＨＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＭＶＧＯＣＳＥＰＡＰＧＦＬＡＦＥＡ

圖３．２－５?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的三級(jí)結(jié)構(gòu)??箭頭表示ＡＣＢＤ結(jié)構(gòu)域中的“結(jié)合口袋”，橙色、亮綠色、淺綠色和藍(lán)色球狀結(jié)構(gòu)分別代表保守性的丙氨酸、??甘氨酸、色氨酸和賴氨酸。??Ｆｉｇ?３．２－５?３Ｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰｌ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??Ｔｈｅ?ａｒｒｏｗ?ｉｎｄｉｃａｔｅｓ?ｔｈｅ?＂＇ｂｉｎｄｉｎｇ?ｐｏｃｋｅｆ?ｏｆ?ＡＣＢＤ?ｄｏｍａｉｎ．?Ｏｒａｎｇｅ，?ｌｉｍｅ，?ａｑｕａ?ａｎｄ?ｂｌｕｅ?ｂａｌｌｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?Ａｌａ，?Ｇｌｙ，??Ｔｒｐ?ａｎｄ?Ｌｙｓ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．??．２?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的克隆、表達(dá)與鑒定??以弓形蟲(chóng)ＲＨ反轉(zhuǎn)錄ｃＤＮＡ為模板，ＰＣＲ擴(kuò)增，分別獲得全長(zhǎng)２８８ｂｐ、９３６ｂｐ的??ＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２，并連接到了Ｔ載體上（圖３．２－６）。??Ａ???Ｂ???Ｃ????ｉ．＇本靈函??１００?ｉ〇〇ｂｐ－Ｃ??－?＇?１??……’＇


本文編號(hào)：3564195