為了能夠快速檢測ETEC菌毛蛋白K99及測定其免疫效價，以純化的大腸埃希菌K99菌毛蛋白為包被抗原，建立了檢測大腸埃希菌K99IgG抗體的間接ELISA方法。確定了間接ELISA的最適反應條件，即抗原包被的ELISA板4℃過夜，最適抗原包被濃度為4.94μg/mL，兔抗體稀釋倍數(shù)為1:50，豬抗體稀釋倍數(shù)為1：200，確定最佳封閉液為100g/L脫脂奶粉，最佳封閉時間為0.5h，血清反應時間為1h，二抗最適濃度梯度為1:2000，反應時間為37℃0.5h，底物室溫反應時間為37℃10min，陰陽性臨界值兔血清為0.25、豬血清為0.35。以純化的大腸埃希菌987P菌毛蛋白為包被抗原，建立了檢測大腸埃希菌987PIgG抗體的間接ELISA方法。確定了間接ELISA的最適反應條件，即抗原包被的ELISA板4℃過夜，最適抗原包被濃度為27.44μg/mL，自制兔抗血清稀釋倍數(shù)為1:10，豬抗體稀釋倍數(shù)為1：200，確定最佳封閉液為100g/L脫脂奶粉，最佳封閉時間為0.5h，血清反應時間為1.5h，二抗最適濃度梯度為1:2000，反應時間為37℃0.5h，底物室溫反應時間為37℃20min，... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

純化K99菌毛蛋白的5DS-PAGE電泳分析

純化587P崖毛蛋白的}}PAGE申脈分析

蛋白表達效果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]ETEC K88菌毛蛋白抗體PPA-ELISA檢測方法的建立[J]. 李書光,李峰,苗立中,張娜,肖躍強,陳金龍,孫翠平,沈志強.  動物醫(yī)學進展. 2012(06)
[2]動物病原大腸桿菌K88的綠色熒光蛋白基因標記及其穩(wěn)定性研究[J]. 車建美,劉波,藍江林.  生物技術通報. 2010(09)
[3]產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F41菌毛抗體間接ELISA檢測方法的建立[J]. 何曉杰,侯喜林,余麗蕓,王桂華,劉建奎,魏春華.  中國獸醫(yī)科學. 2009(04)
[4]產(chǎn)腸毒素大腸桿菌F5菌毛基因的克隆與表達[J]. 于迪,付海兵,丁琳,師東方,單安山.  東北農(nóng)業(yè)大學學報. 2008(06)
[5]微生物高密度培養(yǎng)的研究進展[J]. 劉子宇,李平蘭,鄭海濤,靳志強.  中國乳業(yè). 2005(12)
[6]致病性大腸埃希菌毒力因子致病性及研究進展[J]. 嚴丹紅,郝葆青,吳潤,農(nóng)向.  西南民族大學學報(自然科學版). 2005(S1)
[7]K88 ad ETEC菌毛蛋白亞基基因faeC的克隆、表達及多克隆抗體的制備[J]. 申慧峰,王玉炯,黃亞紅,梁婉琪,周智愛,潘愛虎,錢炳俊,武愛波,張大兵.  上海農(nóng)業(yè)學報. 2005(02)
[8]大腸桿菌熱敏性腸毒素研究進展[J]. 莊娟,曹祥榮,潘潔,饒忠,陳波,尤永進.  上海農(nóng)業(yè)學報. 2005(02)
[9]畜禽基因工程疫苗及診斷技術產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與前景[J]. 童光志,涂長春.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2005(02)
[10]檢測產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌粘附素抗體間接ELISA的建立[J]. 袁萬哲,何孔旺,陸承平.  河北農(nóng)業(yè)大學學報. 2005(01)



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