豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的豬流行性腹瀉是危害養(yǎng)豬（Sus scrofa）生產(chǎn)的具有高度接觸傳染性的重要腸道傳染病,血清學(xué)檢測技術(shù)是臨床調(diào)查PEDV感染狀態(tài)及該病毒相關(guān)研究的重要手段,然而目前尚無鑒別PEDV變異毒株與經(jīng)典毒株的血清學(xué)檢測技術(shù)。單克隆抗體（monoclonal antibody, McAb）是血清學(xué)檢測或診斷技術(shù)研究的重要實(shí)驗(yàn)材料,為了制備鑒別PEDV變異毒株與經(jīng)典毒株的單克隆抗體,應(yīng)用DNAMAN和DNAStar7.1軟件比較分析了PEDV變異毒株與經(jīng)典毒株的纖突（spike, S）蛋白核苷酸序列與氨基酸序列,篩選并合成了變異毒株與經(jīng)典毒株S蛋白氨基酸序列之間的差異序列55IGENQGVNSTWYCAGRHPTAS75。將該多肽偶聯(lián)鑰孔戚血藍(lán)蛋白（keyhole limpet haemocyanin, KLH）后免疫BALB/c小鼠（Mus musculus）,利用細(xì)胞融合技術(shù),經(jīng)過3次克隆篩選和間接酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2020,28(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

PEDV變異毒株與經(jīng)典毒株S蛋白氨基酸序列的比對分析

IFA檢測顯示，在PEDV變異毒株感染的Vero-81細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見綠色熒光，而陰性對照細(xì)胞的胞漿內(nèi)無綠色熒光(圖5)。該結(jié)果表明，McAb 3#與PEDV變異毒株發(fā)生了特異性結(jié)合。進(jìn)一步通過IFA，用抗PEDV-N蛋白單克隆抗體A7和McAb 3#分別檢測感染經(jīng)典弱毒株CV777和變異毒株HBQY2016的Vero-81細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)單克隆抗體A7與變異毒株HBQY2016或經(jīng)典弱毒株CV777均能夠結(jié)合，在感染細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)綠色熒光。然而McAb 3#僅在變異株感染細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)清晰的熒光信號(hào)，在感染經(jīng)典毒株細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)無熒光信號(hào)(圖6)。該結(jié)果表明，McAb 3#可以區(qū)分PEDV變異毒株和經(jīng)典毒株，提示以此抗體為實(shí)驗(yàn)材料，可以進(jìn)一步開展鑒別PEDV變異毒株與經(jīng)典毒株感染的血清學(xué)檢測技術(shù)的研究。圖3 3#雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水抗體效價(jià)

3#雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水抗體效價(jià)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬流行性腹瀉病毒N蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[J]. 張慶橋,王一鵬,魏艷秋,米建華,趙雪,孫立旦,宋勤葉.  中國獸醫(yī)雜志. 2019(01)
[2]豬流行性腹瀉病毒HBMC2012株的分離鑒定及其致病性研究[J]. 朱衛(wèi)霞,郭海勇,陳立功,李艷琴,宋勤葉,李潭清,趙丹萍.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(12)



本文編號(hào)：3559121