為針對(duì)不同動(dòng)物開(kāi)展SARS-CoV-2相關(guān)研究工作提供檢測(cè)手段,針對(duì)SARS-CoV-2 S1蛋白建立了一種可檢測(cè)不同動(dòng)物血清中的SARS-CoV-2抗體的ELISA方法。通過(guò)構(gòu)建表達(dá)SARS-CoV-2 S1蛋白的重組桿狀病毒,收獲重組桿狀病毒培養(yǎng)上清純化蛋白,建立SARS-CoV-2雙抗原夾心ELISA抗體檢測(cè)方法,并評(píng)價(jià)該方法的特異性、敏感性及臨床適用性。結(jié)果顯示,獲得可表達(dá)SARS-CoV-2 S1蛋白的重組桿狀病毒,表達(dá)純化獲得SARS-CoV-2 S1蛋白,并對(duì)該蛋白進(jìn)行HRP標(biāo)記,建立了SARS-CoV-2雙抗原夾心ELISA抗體檢測(cè)方法,該方法檢測(cè)SPF小鼠、兔、豬及動(dòng)物源性冠狀病毒抗體陽(yáng)性血清均為陰性;檢測(cè)SARS-CoV-2 S1蛋白免疫兔血清,稀釋至1∶320時(shí)仍為陽(yáng)性;檢測(cè)SARS-CoV-2人工感染雪貂滅活血清,感染前均為陰性,感染后13 d和20 d均為陽(yáng)性。表明建立的SARS-CoV-2雙抗原夾心ELISA抗體檢測(cè)方法具有良好的特異性、敏感性和臨床適用性,可用于多種動(dòng)物血清中SARS-CoV-2抗體的檢測(cè)。 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

rBacmid-S1的PCR鑒定

將P2代毒種接種Sf9細(xì)胞,72 h后可見(jiàn)細(xì)胞體積明顯增大、細(xì)胞內(nèi)顆粒增多甚至破裂、細(xì)胞增殖受阻、未形成致密的細(xì)胞單層,而正常Sf9細(xì)胞對(duì)照的細(xì)胞大小均一、折光性良好、輪廓清晰,并形成致密的細(xì)胞單層(圖3)。圖2 rBacmid-S1的PCR鑒定

圖2 rBacmid-S1的PCR鑒定將P2代毒種提取核酸后,用PH-F和PH-R進(jìn)行PCR鑒定,重組桿狀病毒的擴(kuò)增產(chǎn)物大小為988 bp,與預(yù)期大小相符,而感染桿狀病毒野毒未擴(kuò)增出條帶,表明獲得了重組桿狀病毒,命名為重組新型冠狀病毒S1蛋白毒種rnCov-S1株(圖4)。


本文編號(hào)：3516836