豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）屬于套式病毒目（Nidovirales）、動(dòng)脈炎病毒科（Arteriviridae）、動(dòng)脈炎病毒屬（Arterivirus）,主要的臨床表現(xiàn)為發(fā)燒,早產(chǎn),流產(chǎn),死胎,木乃伊胎等豬群的繁殖障礙和呼吸道癥狀。GP3蛋白是病毒粒子囊膜的組成部分,是該病毒的次要結(jié)構(gòu)蛋白之一,是由ORF3基因編碼的糖基化糖蛋白,少量存在病毒粒子中,GP3能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,而且在細(xì)胞受體識(shí)別病毒粒子以及在病毒變異等方面具有重要意義。噬菌體展示技術(shù)研究抗原表位不僅可以證明抗原分子的具體結(jié)構(gòu)與功能,還可以揭示抗原抗體的反應(yīng)機(jī)制,并可廣泛的用于研發(fā)多種多肽疫苗和新型藥物。因此,本實(shí)驗(yàn)以PRRSV-HH08株為研究對(duì)象,制備了GP3蛋白單克隆抗體并對(duì)其抗原表位,進(jìn)行了初步的研究。本實(shí)驗(yàn)以原核表達(dá)的PRRSV-GP3蛋白為免疫源免疫小鼠,通過常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞融合,3輪亞克隆后,成功篩選出1株抗PRRSV GP3蛋白的單克隆抗體,經(jīng)亞類鑒定為IgG2a型,該株抗體的穩(wěn)定性與特異... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 豬繁殖與呼吸綜合征(PRRSV)概述
        1.1.1 PRRSV的流行病學(xué)特征
        1.1.2 PRRSV的病原學(xué)特征
        1.1.3 PRRSV的基因組特征
        1.1.4 PRRSV的培養(yǎng)與增殖
        1.1.5 PRRSV GP3蛋白的介紹
        1.1.6 GP3在PRRS新型疫苗研制中的作用
    1.2 抗原表位的研究方法
        1.2.1 抗原表位的概述
        1.2.2 T細(xì)胞抗原表位的研究手段
        1.2.3 B細(xì)胞抗原表位的研究手段
        1.2.4 表位疫苗的研究進(jìn)展
    1.3 研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株、載體與質(zhì)粒
        2.1.2 細(xì)胞與病毒
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 標(biāo)準(zhǔn)參照物
        2.1.6 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 PRRSV-GP3免疫抗原的制備
        2.2.2 PRRSV GP3蛋白單克隆抗體制備
        2.2.3 PRRSV GP3蛋白單克隆抗體的特性鑒定
        2.2.4 應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)篩選PRRSV GP3蛋白抗原表位
3 結(jié)果與分析
    3.1 PRRSV GP3蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
        3.1.1 PRRSV GP3蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.1.2 PRRSV GP3蛋白的純化
    3.2 PRRSV GP3蛋白單克隆抗體制備及特性鑒定
        3.2.1 免疫Balb/C小鼠血清抗體效價(jià)測(cè)定
        3.2.2 最佳抗原抗體工作濃度的確定
        3.2.3 陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞的篩選
        3.2.4 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清效價(jià)的測(cè)定
        3.2.5 單克隆抗體亞類鑒定
        3.2.6 腹水制備與純化
        3.2.7 純化后腹水抗體效價(jià)的測(cè)定
        3.2.8 間接免疫熒光方法鑒定單克隆抗體與PRRSV的結(jié)合情況
        3.2.9 免疫印跡方法鑒定單克隆抗體與GP3蛋白的結(jié)合情況
        3.2.10 單克隆抗體特異性分析
    3.3 PRRSV GP3蛋白抗原表位的篩選
        3.3.1 噬菌體篩選與擴(kuò)增
        3.3.2 親和能力檢測(cè)與測(cè)序
        3.3.3 競(jìng)爭(zhēng)性阻斷實(shí)驗(yàn)
4 討論
    4.1 目的基因的選擇
    4.2 免疫抗原和篩選抗原的選擇
    4.3 Balb/C小鼠的免疫
    4.4 細(xì)胞融合與克隆
    4.5 抗GP3蛋白單克隆抗體1F7的特性分析
    4.6 單克隆抗體腹水制備與純化
    4.7 通過噬菌體展示技術(shù)篩選PRRSV GP3蛋白抗原表位
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒的免疫學(xué)和免疫逃避研究進(jìn)展[J]. 張松林,韓靜,李峰,高三陽(yáng),劉磊,馬永彪,沈志強(qiáng).  病毒學(xué)報(bào). 2012(06)
[2]表位疫苗的設(shè)計(jì)及應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 趙德,馮磊,張強(qiáng),郭建宏,高鳳山.  生命科學(xué). 2012(02)
[3]高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鑒定[J]. 張善瑞,周艷君,朱建平,童武,姜一峰,童光志.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(07)
[4]抗原表位研究方法進(jìn)展[J]. 宋帥,李春玲,賈愛卿,楊冬霞,李淼.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(12)
[5]豬繁殖與呼吸綜合征病毒細(xì)胞受體研究進(jìn)展[J]. 李清州,達(dá)龍珠,鮑登克,陳海燕,楊春英,劉毓霞,喬松林.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2010(12)
[6]豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病機(jī)理的研究進(jìn)展[J]. 劉萍,陳苗苗,喬莉萍,王凡,劉學(xué)榮,牟克斌,黃銀君.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2010(01)
[7]豬瘟病毒E2基因噬菌體展示多肽庫(kù)的構(gòu)建及表位鑒定[J]. 徐和敏,王琴,徐璐,范學(xué)政.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(01)
[8]MyD88-銅綠假單胞菌表位核酸疫苗的構(gòu)建及其真核表達(dá)[J]. 陳建國(guó),蘇兆亮,柳迎昭,王勝軍,黃新祥,邵啟祥,許化溪.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2009(03)
[9]幽門螺桿菌雙亞單位表位疫苗的構(gòu)建及免疫原性研究[J]. 周維英,吳超,石云,鄒全明.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2008(01)
[10]豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF3基因的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J]. 劉金霞,周艷君,安同慶,仇華吉,王云峰,童光志.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2007(05)

碩士論文
[1]PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染細(xì)胞內(nèi)的分布研究[D]. 王中明.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[2]豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5、M和N蛋白單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性分析[D]. 馬蘇.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3516719