發(fā)布時(shí)間：2021-11-13 08:20

　　精原干細(xì)胞（Spermatogonial stem cells, SSCs）是雄性動(dòng)物精子發(fā)生的基礎(chǔ),并通過自我增殖和分化產(chǎn)生大量的精子,維持雄性動(dòng)物終生生育能力。動(dòng)物睪丸中SSCs數(shù)量極少,建立一個(gè)有效的體外培養(yǎng)系統(tǒng),使SSCs在體外大量增殖,以獲得足量的SSCs,再對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)基因調(diào)控后,移植到供體動(dòng)物體內(nèi)或體外分化的方式獲得通過減數(shù)分裂的精細(xì)胞或完整的精子,可為克隆動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)及一些人類遺傳性疾病的基因治療提供新的途徑。山羊是一種經(jīng)濟(jì)適用且孕期短家畜,能用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因重組蛋白和多種有價(jià)值的產(chǎn)品。因此,研究山羊SSCs體外增殖和分化調(diào)控的影響因素可逐步建立山羊SSCs體外培養(yǎng)系統(tǒng),進(jìn)而在生物醫(yī)學(xué)的研究、農(nóng)產(chǎn)品和生物制藥業(yè)上更具有重要的意義。為了逐步建立一個(gè)有效的山羊SSCs體外培養(yǎng)系統(tǒng),使SSCs在體外大量增殖,同時(shí),為以后對(duì)山羊SSCs進(jìn)行轉(zhuǎn)基因調(diào)控后,制作轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。本課題主要開展以下研究：（1）篩選合適日齡的山羊睪丸作為獲取山羊SSCs的材料,以合適日齡的山羊?yàn)楂@得SSCs供體,篩選合適分離睪丸組織為細(xì)胞懸液的消化方法,再篩選的合適日齡和適當(dāng)消化方法的基礎(chǔ)上,進(jìn)而篩選合... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

精原細(xì)胞分化棋型As,單個(gè)A型箱原細(xì)地，Apre成對(duì)的A里箱巨細(xì)胞，Ael,盛狀的A型箱碩細(xì)皿:to:中間型箱原細(xì)甩

安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)?第一章山羊精原干細(xì)胞分離純化方法的建立??純化后睪丸細(xì)胞總量?９．６６?±?２．３１〇／〇、１０．９８?±?４．０３％、７．７１?±?２．４４〇／〇、１２．０４?±?３．２８〇／〇、１３．３４??±１．６９％，Ｗ抗體蟲化法所得的Ｔｈｙ－１＋細(xì)胞數(shù)最低，顯著低于其他各組（尸＜０．０５）；??ＢＳＡ＋層粘連蛋白聯(lián)合純化法所得Ｔｈｙ－１＋細(xì)胞數(shù)顯著高于明膠法、ＢＳＡ法（Ｐ＜化０５），??但明膠法和ＢＳＡ法之間Ｗ及層粘連蛋白和ＢＳＡ＋層粘連蛋白之間差異不顯著（ｆ＞??化０５），結(jié)果表明，ＢＳＡ＋層粘連蛋白聯(lián)合純化所得到的Ｔｈｙ－１＋陽性細(xì)胞數(shù)最多，是５??種方法里最合適的純化方法。??２．３．３細(xì)胞培養(yǎng)后克隆形態(tài)和ＡＫＰ染色??由圖１－１２可知，通過不同純化法得到的山羊睪丸ＳＳＣｓ體外培養(yǎng)１０?ｄ后，形成??典型的ＳＳＣｓ克隆，不同純化法所得到克隆形狀沒有變化，均為致密的邊緣不整齊的??集落狀，突出于睪丸體細(xì)胞向空間發(fā)展。進(jìn)一步通過ＡＫＰ染色可知，不同純化法得??到的山羊睪丸ＳＳＣｓ體外培養(yǎng)后，克陰均表現(xiàn)為ＡＫＰ陽性（圖１－１２Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和??Ｅ）。??

安徽農(nóng)此人學(xué)?巧一竄山羊梢原干細(xì)胞分該純化義讓的建立??化０５），但與明膠純化法、ＢＳＡ純化法相比，沒有顯著性差異存在（＾＞化０５）；明膠??純化法、ＢＳＡ純化法和掉粘連蛋白純化法呈組之間形成的平均克隆數(shù)差異不顯著（Ｐ??＞０．０５）。不同純化法所得到睪丸細(xì)胞懸液培養(yǎng)１０?ｄ后，所形成的ＳＳＣｓ平均克隆面??積分別為?７８３．７９?±?２０９．２２、８３６．２７?±?１８８．３４、７９６．４９?±?１６３．６６、８６７．３１?±?２１３．４４?和?８０６．８４??±２３３．１５?各組之間沒有顯著性差異（Ｐ＞〇．〇５）（圖１－１３８）。??Ｂ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同溫度對(duì)體外培養(yǎng)精原細(xì)胞精子發(fā)生相關(guān)基因的影響[J]. 朱晶晶,王達(dá)利,李三華,鄧呈亮,孫廣峰.  中華男科學(xué)雜志. 2012(02)
[2]精子發(fā)生過程中基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控[J]. 張秀軍,劉美玲,賈孟春.  遺傳. 2011(12)
[3]精原干細(xì)胞增殖和分化相關(guān)因子的研究進(jìn)展[J]. 孫大林,張新東,金保方.  中華男科學(xué)雜志. 2011(03)
[4]STRA8表達(dá)作為出生后雄性生殖細(xì)胞特異性標(biāo)志的應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J]. 盧夏英,楊蓓,徐斯凡,鄒挺.  中華男科學(xué)雜志. 2010(02)
[5]絨山羊Scp3基因的克隆及睪丸中第一輪減數(shù)分裂的發(fā)生[J]. 侯越,吳應(yīng)積,羅奮華,蘇慧敏,張學(xué)明,張巖,白音巴圖,劉陶迪.  動(dòng)物學(xué)研究. 2009(03)
[6]精原干細(xì)胞和睪丸組織的同種異體移植[J]. 黃永平,鄧耀良,關(guān)曉峰,黎承楊.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(53)
[7]溫度對(duì)體外培養(yǎng)精原細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 張曉麗,高英茂,趙舒武,邴魯軍.  解剖學(xué)雜志. 2008(06)
[8]大鼠睪丸支持細(xì)胞的分離、鑒定與培養(yǎng)[J]. 邱志群,舒為群,付文娟,曹佳.  癌變.畸變.突變. 2008(04)
[9]肝細(xì)胞生長因子和器官纖維化[J]. 扈琳,劉芙蓉,李英.  中國老年學(xué)雜志. 2008(02)
[10]同源物種不同飼養(yǎng)層對(duì)雞精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響[J]. 魏彩霞,孫國波,余飛,李碧春.  中國家禽. 2007(12)

博士論文
[1]牛雄性生殖干細(xì)胞體外長期培養(yǎng)的研究[D]. 畢聰明.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007
[2]牛雄性生殖干細(xì)胞分離培養(yǎng)特性及移植研究[D]. 董武子.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006

碩士論文
[1]體外培養(yǎng)生精細(xì)胞的增殖分化效應(yīng)及顯微授精研究[D]. 宋小敏.安徽醫(yī)科大學(xué) 2012
[2]奶山羊雄性生殖干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及向精子細(xì)胞的誘導(dǎo)分化[D]. 朱海鯨.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2011
[3]小鼠精原干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化[D]. 宋銳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]山羊精原細(xì)胞體外分離及培養(yǎng)分化與移植[D]. 楊延飛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3492679