原始生殖細(xì)胞（Primordial germ cells,PGCs）經(jīng)體外培養(yǎng)后可形成胚胎生殖細(xì)胞（Embryonic germ cells, EGCs）。胚胎發(fā)育初期,單能性的PGCs向生殖嵴遷移的同時(shí)大量增殖,進(jìn)入生殖嵴后,PGCs經(jīng)歷了表觀遺傳重編程并最終分化為配子；在體外適宜的培養(yǎng)條件下,PGCs向生殖細(xì)胞的特化被阻斷,重編程為能夠自我更新且具多向分化潛能的EGCs。目前,對(duì)于該過(guò)程機(jī)制的研究主要集中在小鼠上,豬上的報(bào)道多是關(guān)于EGC建系的嘗試和PGC特化相關(guān)的表觀遺傳學(xué)調(diào)控的研究,而對(duì)于豬PGCs本身生物學(xué)特性、特別是其重編程過(guò)程中多能性、生殖系標(biāo)志基因表達(dá)模式的研究鮮有報(bào)道。然而,該方面的探索不僅有利于豬EGCs的最終建系,還對(duì)豬生殖細(xì)胞體內(nèi)發(fā)育機(jī)制的闡述具有重要意義。鑒于此,本課題以豬PGC為研究對(duì)象,探索了PGCs體外重編程為EGCs過(guò)程中的生長(zhǎng)行為變化,多能性、生殖系標(biāo)志基因及信號(hào)通路受體的表達(dá)模式,以及bFGF在該過(guò)程中的作用,從而為探索豬PGCs體外重編程的作用機(jī)理和最終獲得具有多能性且穩(wěn)定傳代的EGCs提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：（1）通過(guò)組織切片的HE染色... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 胚胎干細(xì)胞研究進(jìn)展
        1.1.1 胚胎干細(xì)胞(ESCs)的研究進(jìn)展
        1.1.2 豬胚胎干細(xì)胞(ESCs)的研究進(jìn)展
    1.2 哺乳動(dòng)物原始生殖細(xì)胞的發(fā)育
        1.2.1 原始生殖細(xì)胞的特化
        1.2.2 原始生殖細(xì)胞的遷移
        1.2.3 原始生殖細(xì)胞甲基化的去除與重建
    1.3 影響原始生殖細(xì)胞重編程的細(xì)胞因子
        1.3.1 白血病抑制因子(1euckemia inhibitory factor,Lif)
        1.3.2 干細(xì)胞因子(Stem Cell Factors,SCF)
        1.3.3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)
        1.3.4 腺苷酸環(huán)化酶激活劑(Forskolin)
        1.3.5 堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)
    1.4 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及試劑盒
        2.1.4 常用試劑及配制
        2.1.5 主要的生物信息學(xué)網(wǎng)站及分析軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 豬生殖嵴組織學(xué)切片制作
        2.2.2 豬生殖嵴的蘇木素-伊紅染色
        2.2.3 豬生殖嵴的堿性磷酸酶染色
        2.2.4 豬原始生殖細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 豬原始生殖細(xì)胞的堿性磷酸酶檢測(cè)
        2.2.6 豬原始生殖細(xì)胞的分化能力檢測(cè)
        2.2.7 免疫熒光檢測(cè)
        2.2.8 基因表達(dá)檢測(cè)
3 結(jié)果
    3.1 豬胚胎生殖嵴的發(fā)育
    3.2 豬原始生殖細(xì)胞的生物學(xué)特性
        3.2.1 豬原始生殖細(xì)胞的獲得
        3.2.2 豬原始生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)行為
        3.2.3 豬類胚胎生殖細(xì)胞的體外分化
        3.2.4 豬類胚胎生殖細(xì)胞的多能性及生殖系基因的表達(dá)
    3.3 bFGF對(duì)原始生殖細(xì)胞克隆形成的影響
        3.3.1 豬類胚胎生殖細(xì)胞表面受體的表達(dá)
        3.3.2 堿性成纖維生長(zhǎng)因子對(duì)原始生殖細(xì)胞克隆形成的影響
4 討論
    4.1 豬原始生殖細(xì)胞的生長(zhǎng)行為
    4.2 bFGF對(duì)豬原始生殖細(xì)胞重編程的影響
    4.3 生殖系基因在豬類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.1 Blimp1在類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.2 Stella在類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.3 Ifitm3在類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
        4.3.4 Nanos1在類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
    4.4 多能性基因在豬類胚胎生殖細(xì)胞中的表達(dá)
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]The culture and establishment of embryonic germ（EG）cell lines from Chinese mini swine[J]. HSIAO CHIEN TSUNG.  Cell Research. 2003(03)



本文編號(hào)：3439750