山羊瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)規(guī)律與機制的研究
發(fā)布時間:2021-09-30 08:02
目前反芻動物氮利用效率偏低(G. Lobely, J. MacRea),其原因可能是:飼料氮源隨動物糞尿的排出;日糧優(yōu)質(zhì)蛋白的降解;微生物蛋白在瘤胃內(nèi)的再循環(huán)。在瘤胃微生態(tài)系統(tǒng)中,原蟲的吞噬行為、自溶現(xiàn)象以及高的脫氨基活性都可能加劇瘤胃內(nèi)氮素的無效循環(huán),降低氮的利用效率。為此,本課題從動態(tài)角度,結(jié)合微生態(tài)瘤胃內(nèi)環(huán)境、微生物氮周轉(zhuǎn)、微生物活性、微生物區(qū)系變化及主要微生物相對數(shù)量的變化,系統(tǒng)地探討瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)的規(guī)律及其機制。在生產(chǎn)中可采用有效的營養(yǎng)調(diào)控措施,提高反芻動物對氮的利用效率。第一章瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)研究方法的建立本試驗旨在探討熒光光度法研究瘤胃原蟲對細菌吞噬作用的可行性。試驗選用4只裝有永久性瘤胃瘺管的徐淮山羊采集瘤胃液以獲取瘤胃原蟲和細菌,以4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)標(biāo)記細菌的熒光強度為主要測定指標(biāo),研究山羊瘤胃中原蟲對細菌的吞噬作用。結(jié)果表明,DAPI標(biāo)記的瘤胃細菌濃度與其熒光強度之間存在線性相關(guān)(R2=0.9952)。在日糧粗精比為7:3的條件下,徐淮山羊瘤胃原蟲對細菌的吞噬速率為370.89cells/(cell·h),瘤胃內(nèi)原蟲對細菌的...
【文章來源】:揚州大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】:165 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
符號說明
第一篇 文獻綜述
第一章 反芻動物瘤胃微生物對含氮物質(zhì)的代謝研究
1. 反芻動物瘤胃內(nèi)氮源物質(zhì)的轉(zhuǎn)化
2. 瘤胃微生物對含氮物質(zhì)的利用研究
2.1 瘤胃細菌對飼料中不同含氮物質(zhì)的利用
2.1.1 瘤胃細菌對蛋白的降解
2.1.2 不同含氮物質(zhì)對瘤胃細菌的促生長作用
2.2 瘤胃原蟲對不同形式含氮物質(zhì)的利用
2.3 瘤胃真菌對不同含氮物質(zhì)的利用
2.4 瘤胃微生物在蛋白降解中的協(xié)同作用
3 影響瘤胃微生物降解蛋白質(zhì)的因素
3.1 蛋白質(zhì)類型的影響
3.2 日糧類型的影響
3.3 其他因素的影響
4. 瘤胃微生物蛋白質(zhì)的合成代謝及其影響因素
4.1 瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成代謝概況
4.2 微生物蛋白合成的影響因素
4.2.1 氮源
4.2.2 能量
4.2.3 溫度
4.2.4 瘤胃液pH值和稀釋率
4.2.5 蛋白質(zhì)和碳水化合物消化的同步性
第二章 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)的研究進展
1. 瘤胃內(nèi)微生物氮代謝的研究
1.1 微生物氮代謝相關(guān)指標(biāo)
1.1.1 微生物蛋白合成效率
1.1.2 微生物氮占可利用氮的比例
2. 瘤胃微生物氮循環(huán)研究
2.1 研究方法
2.1.1 微生物蛋白合成率的研究方法
2.1.2 原蟲與細菌之間吞噬關(guān)系的研究方法
(1) 同位素標(biāo)記法
(2) 熒光標(biāo)記法
2.2. 微生物氮循環(huán)影響因素
3. 本課題的導(dǎo)出
4 理論假說的提出
4.1 理論假說與機制
4.2 理論假說的機理假定
5. 實驗論證的技術(shù)路線
5.1 DAPI熒光強度法研究瘤胃原蟲對細菌的吞噬關(guān)系
5.2 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)規(guī)律與機制的研究
6. 研究意義及目標(biāo)
第二篇 試驗研究
第一章 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)方法的建立
引言
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.2 試驗動物
1.3 試驗方法
1.3.1 瘤胃細菌與原蟲的分離
1.3.2 DAPI熒光標(biāo)記瘤胃細菌
1.3.3 吞噬試驗
1.3.4 熒光強度測定
1.4 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
2.1 DAPI熒光標(biāo)記瘤胃細菌標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線中標(biāo)記細菌濃度的設(shè)置
2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
2.2 不同吞噬時間點游離細菌熒光強度的變化
2.3 瘤胃原蟲對細菌的吞噬率及吞噬量
2.3.1 原蟲對細菌吞噬量的計算
2.3.2 瘤胃原蟲對細菌的吞噬率及吞噬量結(jié)果
3 討論
4 小結(jié)
第二章 不同日糧精粗比對瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理
1.1.2 瘤胃液的采集
1.1.3 體外發(fā)酵裝置
1.1.4 人工唾液配方
1.1.4.1 緩沖試劑和常量元素溶液——A液
1.1.4.2 微量元素溶液——B液
1.1.4.3 維生素溶液——C液
1.1.4.4 還原劑溶液——D液
1.1.4.5 緩沖液制備
1.1.4.6 供試培養(yǎng)液
1.2 試驗設(shè)計
1.3 測定指標(biāo)與方法
1.3.1 常規(guī)指標(biāo)測定方法
1.3.1.1 微生物的分離
1.3.1.2 pH值的測定
1.3.1.3 氨氮濃度的測定
1.3.1.4 微生物真蛋白的測定
1.3.1.5 可溶性蛋白的測定
1.3.1.6 培養(yǎng)液肽氮的測定
1.3.1.7 培養(yǎng)液AA-N的測定
1.3.1.8 微生物計數(shù)
1.3.2 SSCP檢測
1.3.2.1 瘤胃微生物基因組DNA的提取
1.3.2.2 原蟲與細菌保守區(qū)域片段的擴增
1.3.2.3 SSCP檢測(非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)
1.3.2.4 SSCP指紋圖譜分析
1.3.3 三種重要蛋白降解菌的定量檢測
1.3.3.1 DNA濃度的測定
1.3.3.2 保守區(qū)域片段的擴增
1.4 計算公式
1.5 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
2.1 精粗比對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.1.1 精粗比對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 精粗比對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.2 精粗比對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2. 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.4 相關(guān)性分析
2.2.2.4.1 微生物氮周轉(zhuǎn)速率之間的相關(guān)性分析
2.2.2.4.2 微生物氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.2.5 微生物氮周轉(zhuǎn)速率與底物精粗比值的回歸分析
2.2.3 精粗比對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 精粗比對微生物區(qū)系的影響
2.3.1 精粗比對微生物區(qū)系比例的影響
2.3.2 PCR-SSCP分析
2.3.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.3.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.4 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同精粗比對瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
3.1.1 精粗比對pH的影響
3.1.2 精粗比對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
3.2 對微生物與瘤胃內(nèi)環(huán)境間含氮物質(zhì)周轉(zhuǎn)的影響
3.2.1 瘤胃微生態(tài)氮素微循環(huán)研究方法的探討
3.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.2.3 對微生物蛋白產(chǎn)量的影響
3.2.4 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.2.5 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
3.2.6 對瘤胃內(nèi)環(huán)境中氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 對微生物區(qū)系及區(qū)系內(nèi)類群結(jié)構(gòu)的影響
4 小結(jié)
第三章 不同碳源結(jié)構(gòu)NSC/SC對瘤胃原蟲與細菌間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
1.3 增測指標(biāo)
1.4 測定方法
1.4.1 VFA的測定
1.4.2 肽酶活性的測定
1.4.3 蛋白酶活性的測定
1.4.4 原蟲細胞膜破碎方法
2 結(jié)果與分析
2.1 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液內(nèi)瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
2.1.1 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同NSC/SC純合日糧對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 不同NSC/SC對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 統(tǒng)計分析
2.2.2.3.1 微生物之間氮周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.3.2 微生物氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.2.3.3 氮周轉(zhuǎn)速率與底物NSC/SC值的回歸分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同NSC/SC日糧對原蟲胞內(nèi)、外肽酶和蛋白酶活性的影響
2.4 不同NSC/SC日糧對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.4.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.4.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同NSC/SC對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對培養(yǎng)液中揮發(fā)性脂肪酸(VFA)濃度的影響
3.2 不同NSC/SC對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同NSC/SC對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同NSC/SC對微生物活性的影響
4 小結(jié)
第四章 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃原蟲與細菌間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
1.3 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
2.1 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對培養(yǎng)液內(nèi)瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
2.1.1 對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對微生物氮素周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.2.1 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮與微生物總氮隨時間動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物活性的影響
2.3.1 對原蟲胞內(nèi)蛋白酶和肽酶活性的影響
2.3.2 對培養(yǎng)液主要纖維降解酶活性的影響
2.4 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對VFA濃度的影響
3.2 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對培養(yǎng)液中纖維降解酶活性的影響
3.5 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對三種主要的蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
第五章 不同單體氨基酸對瘤胃原蟲與細菌之間的氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)
1.2.1 測定指標(biāo)
1.2.2 測定方法
1.2.2.1 尿素氮測定
1.2.2.2 濾紙纖維素酶活性
1.2.2.3 木聚糖酶活性
1.2.2.4 果膠酶活性
1.2.2.5 淀粉酶活性
2 結(jié)果與分析
2.1 不同單體氨基酸對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.1.1 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同單體氨基酸對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 不同單體氨基酸對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 不同單體氨基酸對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.2.2 不同單體氨基酸對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮隨時間動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同單體氨基酸對微生物活性的影響
2.3.1 對原蟲胞內(nèi)蛋白酶活性的影響
2.3.2 對主要纖維酶活性的影響
2.4 不同單體氨基酸對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.4.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.4.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同單體氨基酸對瘤胃瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對培養(yǎng)液VFA濃度的影響
3.2 不同單體氨基酸對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同單體氨基酸對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同單體氨基酸對微生物活性的影響
3.5 不同單體氨基酸對主要蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
第六章 不同原蟲控制劑對瘤胃微生物氮周轉(zhuǎn)作用的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
2 結(jié)果與分析
2.1 不同原蟲控制劑對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.2 不同原蟲控制劑對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.3 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間氮周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同原蟲控制劑對微生物區(qū)系的影響
2.3.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.3.2 PCR-SSCP分析
2.4 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同原蟲控制劑對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
3.2 不同原蟲控制劑對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 對主要蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
全文總論與研究展望
1 全文討論
1.1 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)研究方法探討
1.1.1 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)研究方法的建立
1.1.2 吞噬試驗中瘤胃微生態(tài)的模擬
1.2 瘤胃原蟲與細菌之間氮素循環(huán)的規(guī)律
1.3 瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)與微生物氮素周轉(zhuǎn)的關(guān)系
1.4 瘤胃微生物種群結(jié)構(gòu)與微生物氮素周轉(zhuǎn)的關(guān)系
1.5 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響機制
2 全文結(jié)論
3 研究創(chuàng)新點
4 研究展望
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
【參考文獻】:
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本文編號:3415448
【文章來源】:揚州大學(xué)江蘇省
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符號說明
第一篇 文獻綜述
第一章 反芻動物瘤胃微生物對含氮物質(zhì)的代謝研究
1. 反芻動物瘤胃內(nèi)氮源物質(zhì)的轉(zhuǎn)化
2. 瘤胃微生物對含氮物質(zhì)的利用研究
2.1 瘤胃細菌對飼料中不同含氮物質(zhì)的利用
2.1.1 瘤胃細菌對蛋白的降解
2.1.2 不同含氮物質(zhì)對瘤胃細菌的促生長作用
2.2 瘤胃原蟲對不同形式含氮物質(zhì)的利用
2.3 瘤胃真菌對不同含氮物質(zhì)的利用
2.4 瘤胃微生物在蛋白降解中的協(xié)同作用
3 影響瘤胃微生物降解蛋白質(zhì)的因素
3.1 蛋白質(zhì)類型的影響
3.2 日糧類型的影響
3.3 其他因素的影響
4. 瘤胃微生物蛋白質(zhì)的合成代謝及其影響因素
4.1 瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成代謝概況
4.2 微生物蛋白合成的影響因素
4.2.1 氮源
4.2.2 能量
4.2.3 溫度
4.2.4 瘤胃液pH值和稀釋率
4.2.5 蛋白質(zhì)和碳水化合物消化的同步性
第二章 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)的研究進展
1. 瘤胃內(nèi)微生物氮代謝的研究
1.1 微生物氮代謝相關(guān)指標(biāo)
1.1.1 微生物蛋白合成效率
1.1.2 微生物氮占可利用氮的比例
2. 瘤胃微生物氮循環(huán)研究
2.1 研究方法
2.1.1 微生物蛋白合成率的研究方法
2.1.2 原蟲與細菌之間吞噬關(guān)系的研究方法
(1) 同位素標(biāo)記法
(2) 熒光標(biāo)記法
2.2. 微生物氮循環(huán)影響因素
3. 本課題的導(dǎo)出
4 理論假說的提出
4.1 理論假說與機制
4.2 理論假說的機理假定
5. 實驗論證的技術(shù)路線
5.1 DAPI熒光強度法研究瘤胃原蟲對細菌的吞噬關(guān)系
5.2 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)規(guī)律與機制的研究
6. 研究意義及目標(biāo)
第二篇 試驗研究
第一章 瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)方法的建立
引言
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.2 試驗動物
1.3 試驗方法
1.3.1 瘤胃細菌與原蟲的分離
1.3.2 DAPI熒光標(biāo)記瘤胃細菌
1.3.3 吞噬試驗
1.3.4 熒光強度測定
1.4 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
2.1 DAPI熒光標(biāo)記瘤胃細菌標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線中標(biāo)記細菌濃度的設(shè)置
2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
2.2 不同吞噬時間點游離細菌熒光強度的變化
2.3 瘤胃原蟲對細菌的吞噬率及吞噬量
2.3.1 原蟲對細菌吞噬量的計算
2.3.2 瘤胃原蟲對細菌的吞噬率及吞噬量結(jié)果
3 討論
4 小結(jié)
第二章 不同日糧精粗比對瘤胃原蟲與細菌之間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.1.1 試驗動物與飼養(yǎng)管理
1.1.2 瘤胃液的采集
1.1.3 體外發(fā)酵裝置
1.1.4 人工唾液配方
1.1.4.1 緩沖試劑和常量元素溶液——A液
1.1.4.2 微量元素溶液——B液
1.1.4.3 維生素溶液——C液
1.1.4.4 還原劑溶液——D液
1.1.4.5 緩沖液制備
1.1.4.6 供試培養(yǎng)液
1.2 試驗設(shè)計
1.3 測定指標(biāo)與方法
1.3.1 常規(guī)指標(biāo)測定方法
1.3.1.1 微生物的分離
1.3.1.2 pH值的測定
1.3.1.3 氨氮濃度的測定
1.3.1.4 微生物真蛋白的測定
1.3.1.5 可溶性蛋白的測定
1.3.1.6 培養(yǎng)液肽氮的測定
1.3.1.7 培養(yǎng)液AA-N的測定
1.3.1.8 微生物計數(shù)
1.3.2 SSCP檢測
1.3.2.1 瘤胃微生物基因組DNA的提取
1.3.2.2 原蟲與細菌保守區(qū)域片段的擴增
1.3.2.3 SSCP檢測(非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳)
1.3.2.4 SSCP指紋圖譜分析
1.3.3 三種重要蛋白降解菌的定量檢測
1.3.3.1 DNA濃度的測定
1.3.3.2 保守區(qū)域片段的擴增
1.4 計算公式
1.5 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
2.1 精粗比對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.1.1 精粗比對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 精粗比對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.2 精粗比對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2. 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.4 相關(guān)性分析
2.2.2.4.1 微生物氮周轉(zhuǎn)速率之間的相關(guān)性分析
2.2.2.4.2 微生物氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.2.5 微生物氮周轉(zhuǎn)速率與底物精粗比值的回歸分析
2.2.3 精粗比對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 精粗比對微生物區(qū)系的影響
2.3.1 精粗比對微生物區(qū)系比例的影響
2.3.2 PCR-SSCP分析
2.3.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.3.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.4 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同精粗比對瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
3.1.1 精粗比對pH的影響
3.1.2 精粗比對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
3.2 對微生物與瘤胃內(nèi)環(huán)境間含氮物質(zhì)周轉(zhuǎn)的影響
3.2.1 瘤胃微生態(tài)氮素微循環(huán)研究方法的探討
3.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.2.3 對微生物蛋白產(chǎn)量的影響
3.2.4 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.2.5 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
3.2.6 對瘤胃內(nèi)環(huán)境中氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 對微生物區(qū)系及區(qū)系內(nèi)類群結(jié)構(gòu)的影響
4 小結(jié)
第三章 不同碳源結(jié)構(gòu)NSC/SC對瘤胃原蟲與細菌間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
1.3 增測指標(biāo)
1.4 測定方法
1.4.1 VFA的測定
1.4.2 肽酶活性的測定
1.4.3 蛋白酶活性的測定
1.4.4 原蟲細胞膜破碎方法
2 結(jié)果與分析
2.1 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液內(nèi)瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
2.1.1 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 不同NSC/SC日糧對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同NSC/SC純合日糧對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 不同NSC/SC對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 統(tǒng)計分析
2.2.2.3.1 微生物之間氮周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.3.2 微生物氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.2.3.3 氮周轉(zhuǎn)速率與底物NSC/SC值的回歸分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同NSC/SC日糧對原蟲胞內(nèi)、外肽酶和蛋白酶活性的影響
2.4 不同NSC/SC日糧對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.4.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.4.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同NSC/SC對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對培養(yǎng)液中揮發(fā)性脂肪酸(VFA)濃度的影響
3.2 不同NSC/SC對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同NSC/SC對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同NSC/SC對微生物活性的影響
4 小結(jié)
第四章 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃原蟲與細菌間氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
1.3 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果與分析
2.1 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對培養(yǎng)液內(nèi)瘤胃內(nèi)環(huán)境參數(shù)的影響
2.1.1 對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對微生物氮素周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.2.1 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.2.2 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮與微生物總氮隨時間動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物活性的影響
2.3.1 對原蟲胞內(nèi)蛋白酶和肽酶活性的影響
2.3.2 對培養(yǎng)液主要纖維降解酶活性的影響
2.4 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對VFA濃度的影響
3.2 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對培養(yǎng)液中纖維降解酶活性的影響
3.5 不同分子結(jié)構(gòu)氮源對三種主要的蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
第五章 不同單體氨基酸對瘤胃原蟲與細菌之間的氮周轉(zhuǎn)的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)
1.2.1 測定指標(biāo)
1.2.2 測定方法
1.2.2.1 尿素氮測定
1.2.2.2 濾紙纖維素酶活性
1.2.2.3 木聚糖酶活性
1.2.2.4 果膠酶活性
1.2.2.5 淀粉酶活性
2 結(jié)果與分析
2.1 不同單體氨基酸對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.1.1 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液pH的影響
2.1.2 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
2.1.3 不同單體氨基酸對培養(yǎng)液揮發(fā)性脂肪酸(VFA)的影響
2.2 不同單體氨基酸對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 不同單體氨基酸對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 不同單體氨基酸對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.2.2 不同單體氨基酸對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.3 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮隨時間動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同單體氨基酸對微生物活性的影響
2.3.1 對原蟲胞內(nèi)蛋白酶活性的影響
2.3.2 對主要纖維酶活性的影響
2.4 不同單體氨基酸對微生物區(qū)系的影響
2.4.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.4.2 PCR-SSCP分析
2.4.2.1 PCR擴增結(jié)果
2.4.2.2 SSCP多態(tài)性分析
2.5 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同單體氨基酸對瘤胃瘤胃內(nèi)環(huán)境發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對氨氮濃度的影響
3.1.3 對培養(yǎng)液VFA濃度的影響
3.2 不同單體氨基酸對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 不同單體氨基酸對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 不同單體氨基酸對微生物活性的影響
3.5 不同單體氨基酸對主要蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
第六章 不同原蟲控制劑對瘤胃微生物氮周轉(zhuǎn)作用的影響
引言
1 材料與方法
1.1 試驗設(shè)計
1.2 測定指標(biāo)與方法
2 結(jié)果與分析
2.1 不同原蟲控制劑對發(fā)酵參數(shù)的影響
2.2 不同原蟲控制劑對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.1 對微生物蛋白含量的影響
2.2.2 對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.1 對細菌氮、原蟲氮及微生物總氮周轉(zhuǎn)速率的影響
2.2.2.2 對原蟲吞噬細菌量和吞噬速率的影響
2.2.2.3 對原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響
2.2.2.4 細菌氮、原蟲氮及微生物總氮之間氮周轉(zhuǎn)速率的相關(guān)性分析
2.2.3 對培養(yǎng)液中主要含氮物質(zhì)組分的影響
2.2.4 瘤胃內(nèi)環(huán)境總氮與瘤胃內(nèi)環(huán)境中各主要形式氮之間周轉(zhuǎn)速率動態(tài)變化的相關(guān)性分析
2.3 不同原蟲控制劑對微生物區(qū)系的影響
2.3.1 對微生物區(qū)系比例的影響
2.3.2 PCR-SSCP分析
2.4 三種重要蛋白降解菌的定量分析
3 討論
3.1 不同原蟲控制劑對瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響
3.1.1 對pH值的影響
3.1.2 對培養(yǎng)液氨氮濃度的影響
3.2 不同原蟲控制劑對微生物氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.3 對瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)的影響
3.4 對主要蛋白降解菌的影響
4 小結(jié)
全文總論與研究展望
1 全文討論
1.1 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)研究方法探討
1.1.1 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)研究方法的建立
1.1.2 吞噬試驗中瘤胃微生態(tài)的模擬
1.2 瘤胃原蟲與細菌之間氮素循環(huán)的規(guī)律
1.3 瘤胃內(nèi)環(huán)境氮素周轉(zhuǎn)與微生物氮素周轉(zhuǎn)的關(guān)系
1.4 瘤胃微生物種群結(jié)構(gòu)與微生物氮素周轉(zhuǎn)的關(guān)系
1.5 瘤胃原蟲與細菌之間氮素周轉(zhuǎn)的影響機制
2 全文結(jié)論
3 研究創(chuàng)新點
4 研究展望
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
【參考文獻】:
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本文編號:3415448
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