兔病毒性出血癥（Rabbit hemorrhagic disease,RHD）是由兔出血癥病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）引起的一種急性、高傳染性和致死性兔病,該病主要以呼吸系統(tǒng)出血、實質(zhì)器官淤血水腫、肝臟壞死、淤血及出血性變化為主要特征,嚴重危害著世界養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展。RHDV為單股正鏈RNA病毒,基因組全長約7.5kb。目前RHDV在體外尚無穩(wěn)定分離培養(yǎng)的細胞系,嚴重影響著RHDV的細胞侵染機理和防控等方面的研究。為探索RHDV侵染機制,本研究通過酶消化法對乳兔脾臟原代細胞進行了分離培養(yǎng)與建系,并進行建系細胞的RHDV初步感染試驗,具體內(nèi)容如下:1、培養(yǎng)乳兔原代細胞的過程中,從脾臟組織中分離出一株成纖維型形態(tài)的細胞,命名為RS-17,通過對細胞傳代培養(yǎng)條件優(yōu)化、細胞標志性蛋白檢測、細胞生長曲線、細胞核型以及細胞致瘤性等進行測定,以對細胞的生長特性以及生物學特性進行研究。結(jié)果顯示RS-17細胞具有血清依懶性、成纖維細胞標志性蛋白檢測陽性、具有正常的核型、無致瘤性,且目前細胞傳至95代仍可穩(wěn)定生長。這為RHDV感染機制相關(guān)研究提供了細胞材料... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

脾臟原代細胞培養(yǎng)（100）

16E圖 2-2 RS-17 細胞形態(tài)（100 ）A：20 代；B：30 代；C：50 代；D：80 代；E：95 代Fig.2-2 Micrograph of RS-17 （100 ）A: Passages 20; B: Passages 30; C: Passages 50; D: Passages 80; E: Passages 97 的凍存與復蘇 細胞在經(jīng)過逐漸降溫法凍存于液氮后，第 3 天將其從液氮中取出過夜，細胞貼壁，生長狀態(tài)良好，細胞呈長梭形，與未凍存細胞生鋪滿瓶底，且能穩(wěn)定的繼續(xù)傳代培養(yǎng)。

懶性T 比色結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學分析如圖 2-3 所示，RS-17 細胞清的培養(yǎng)基中，細胞生長較緩慢，有血清培養(yǎng)基對細)，各血清含量的培養(yǎng)基對細胞的促進作用進行比較清培養(yǎng)基相比促進細胞增值作用無顯著性的差異（ 3%相比有極顯著促進作用（P 0.01），5%、15%、顯著性差異（P 0.05），10%、15%、20%三者血清顯著性差異（P 0.05）。根據(jù)各濃度血清的促生長作生長的最優(yōu)血清濃度為 10%。


本文編號：3415206