β防御素是一類具有廣譜抗菌活性的內(nèi)源性小分子陽離子抗菌肽。禽類吞噬細(xì)胞缺乏氧依賴性殺菌機(jī)制,其對細(xì)菌的清除更依賴于陽離子抗菌肽。AvBD6是β防御素家族成員之一,是有前景的新型抗生素替代品。目前,關(guān)于禽β防御素的定量研究報(bào)道較少,而定量研究是深入理解禽β防御素病理生理學(xué)意義及臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)。因此,本研究擬通過建立檢測AvBD6的夾心ELISA法,檢測不同病理生理狀態(tài)下血清或組織中AvBD6的濃度；同時,還探討外源性AvBD6對雞肝臟分泌抗菌肽（LEAP-2）表達(dá)量的影響。主要研究結(jié)果如下：1、建立檢測AvBD6的夾心ELISA法鼠源包被抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的B細(xì)胞線性表位（PGPCRW-KLH）.兔源檢測抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的N端（SPIHACRYQRGV-KLH）。包被抗體、檢測抗體和辣根過氧化酶標(biāo)記的羊抗兔IgG的最佳工作稀釋倍數(shù),分別為2500、2000和10000。在20～320 ng/mL的線性范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=12024x-2583,（其中y為AvBD6合成肽濃度,x為OD450,R2=0.9842）。2、不同病理生理?xiàng)l件下A... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞表
文獻(xiàn)綜述
引言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        1.1.2 主要儀器設(shè)備
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 主要試劑配制
    1.2 方法
        1.2.1 AvBD6和LEAP-2免疫原
        1.2.2 捕獲抗體制備
        1.2.3 檢測抗體制備
        1.2.4 雙抗體夾心ELISA方法建立
        1.2.5雙抗體夾心ELISA法的優(yōu)化
        1.2.6 確定其他ELISA實(shí)驗(yàn)條件的最佳值
        1.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        1.2.8 感染對AvBD6的影響
        1.2.9 應(yīng)激對AvBD6的影響
        1.2.10 注射AvBD6對LEAP-2的影響
        1.2.11 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 檢測AvDB6的ELISA法建立
        2.1.1 確定捕獲抗體最佳工作稀釋度
        2.1.2 確定檢測抗體最佳工作稀釋度
        2.1.3 確定HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG最佳工作稀釋度
        2.1.4 確定其他夾心ELISA實(shí)驗(yàn)條件的最佳值
        2.1.5 雙抗夾心ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.2 感染對AvBD6的影響
        2.2.1 口服禽沙門氏菌感染對AvBD6的影響
        2.2.2 肌肉注射大腸桿菌和沙門氏菌感染對AvBD6的影響
    2.3 應(yīng)激對AvBD6的影響
        2.3.1 冷應(yīng)激對AvBD6的影響
        2.3.2 ACTH注射對AvBD6的影響
    2.4 注射AvBD6對LEAP-2的影響
        2.4.1 注射AvBD6對血清AvBD6的影響
        2.4.2 注射AvBD6對幾種組織中LEAP-2表達(dá)的影響
3 討論
    3.1 AvBD6雙抗體夾心ELISA法的建立
    3.2 細(xì)菌感染對AvBD6的影響
    3.3 應(yīng)激對AvBD6的影響
    3.4 外源AvBD6對LEAP-2的影響
4 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3349409