為了建立可以同時檢測4型禽腺病毒（FAdV-4）、傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）、禽痘病毒（FPV）的方法,試驗參考GenBank上登錄的FAdV-4、ILTV、FPV的基因序列保守片段分別設(shè)計引物,優(yōu)化PCR擴增體系和擴增程序,建立針對以上三種病毒的三重PCR檢測方法,并考察方法的特異性、敏感性及對臨床樣品檢測的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明:最終確定三重PCR最佳擴增體系（50μL）為,FADV-4、ILTV、FPV DNA各5μL,10×Buffer 5μL,dNTP Mix10μL,Mg²⁺5μL,Taq3μL,引物ILTV-R 0.4μL,ILTV-F 0.4μL,FPV-F 0.8μL,FPV-R 0.8μL,FAdV-R 1.8μL,FAdV-F 1.8μL,ddH₂O 6μL。三重PCR最佳擴增程序為95℃預(yù)變性5 min;95℃變性30 s,54℃退火30 s,72℃延伸1 min,共30個循環(huán);72℃終延伸10 min;4℃結(jié)束反應(yīng)。所建立的檢測方法只能擴增FAdV-4、ILTV、FPV,而不能擴增雞馬立克病毒（MDV）、減蛋綜合征病毒... 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(16)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

引物添加比例優(yōu)化結(jié)果

退火溫度優(yōu)化結(jié)果

根據(jù)引物濃度及退火溫度優(yōu)化結(jié)果,最終確定三重PCR最佳擴增體系(50 μL)為:FADV-4、ILTV、FPV DNA各5 μL,10×Buffer 5 μL,dNTP Mix10 μL,Mg2+5 μL,Taq酶3 μL,引物ILTV-R 0.4 μL,ILTV-F 0.4 μL,FPV-F 0.8 μL,FPV-R 0.8 μL,FAdV-R 1.8 μL,FAdV-F 1.8 μL,ddH2O 6 μL。三重PCR最佳擴增程序為:95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性30 s,54 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共30個循環(huán);72 ℃終延伸10 min;4 ℃結(jié)束反應(yīng)。用上述程序擴增FAdV-4、FPV、ILTV核酸擴增結(jié)果與預(yù)期條帶大小一致,見圖3。3.2 特異性試驗


本文編號：3291801