Y染色體雄性特異區(qū)基因在性別決定和雄性繁殖力方面具有重要的作用。先前的研究表明ZNF280AY、ZNF280BY和PRAMEY基因是�？苿游锾赜械腨染色體多拷貝基因,在睪丸中高表達或特異性表達,其拷貝數(shù)變異與公牛繁殖性狀顯著相關(guān)。由于綿羊Y染色體測序沒有完成,故尚未有研究對綿羊Y染色體多拷貝基因進行報道。本研究基于牛ZNF280AY、ZNF280BY和PRAMEY基因的序列以及本課題組前期綿羊睪丸組織RNA-Seq數(shù)據(jù)設(shè)計雄性特異性引物,采用cDNA末端快速擴增技術(shù)（Rapid amplification of cDNA ends,RACE）和實時定量PCR（quantitative PCR,qPCR）技術(shù)獲得綿羊ZNF280BY和PRAMEY基因cDNA全長以及它們在不同組織和睪丸不同發(fā)育階段的表達特征,并利用相關(guān)軟件對序列進行生物信息學分析,預測基因結(jié)構(gòu)和功能;同時利用qPCR技術(shù)檢測ZNF280AY、ZNF280BY和PRAMEY基因在8個品種723只綿羊中的拷貝數(shù)變異（Copy number variation,CNV）,并分析CNV與湖羊睪丸大小相關(guān)指標的相關(guān)性。主要研究結(jié)果... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略表
第一章 文獻綜述
    1.1 Y染色體的特征
    1.2 Y染色體的生物學功能
    1.3 牛科動物特有Y染色體多拷貝基因的研究進展
        1.3.1 ZNF280AY基因的研究進展
        1.3.2 ZNF280BY基因的研究進展
        1.3.3 PRAMEY基因的研究進展
    1.4 拷貝數(shù)變異的研究概述
        1.4.1 CNV的形成機制和作用機理
        1.4.2 拷貝數(shù)變異的檢測技術(shù)
        1.4.3 拷貝數(shù)變異的研究進展
    1.5 RACE技術(shù)概述
        1.5.1 RACE技術(shù)的原理
        1.5.2 RACE技術(shù)的特點
        1.5.3 RACE技術(shù)的應(yīng)用前景
    1.6 生物信息學概述
        1.6.1 生物信息學的發(fā)展歷程
        1.6.2 生物信息學的應(yīng)用前景
    1.7 本研究的目的和意義
    1.8 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.8.1 主要研究內(nèi)容
        1.8.2 技術(shù)路線
第二章 綿羊ZNF280BY和 PRAMEY基因cDNA的克隆及生物信息學分析
    2.1 引言
    2.2 試驗材料、試劑及儀器
        2.2.1 試驗材料
        2.2.2 試驗試劑和儀器
    2.3 試驗方法
        2.3.1 湖羊睪丸和卵巢組織DNA和 RNA的提取與檢測
        2.3.2 綿羊ZNF280BY和 PRAMEY基因中間片段的擴增
        2.3.3 PCR產(chǎn)物TA克隆測序
        2.3.4 綿羊ZNF280BY和 PRAMEY基因5'/3'RACE
        2.3.5 RACE產(chǎn)物TA克隆測序
        2.3.6 ZNF280BY和 PRAMEY基因的生物信息學分析
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 組織DNA和 RNA的檢測
        2.4.2 綿羊ZNF280BY基因c DNA全長擴增及序列分析
        2.4.3 綿羊PRAMEY基因c DNA全長擴增及序列分析
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 綿羊3個牛科動物特有Y染色體多拷貝基因的表達特征分析
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 試驗動物
        3.2.2 試劑與儀器
    3.3 試驗方法
        3.3.1 DNA和 RNA提取與檢測
        3.3.2 cDNA的合成
        3.3.3 引物設(shè)計
        3.3.4 半定量PCR鑒定基因組織表達譜
        3.3.5 Quantitative PCR
        3.3.6 數(shù)據(jù)分析
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 半定量PCR鑒定基因組織表達譜
        3.4.2 ZNF280BY基因表達特征分析
        3.4.3 PRAMEY基因表達特征分析
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第四章 綿羊Y染色體3個多拷貝基因CNV與公羊睪丸大小相關(guān)指標的關(guān)聯(lián)研究
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 樣品采集及繁殖性狀數(shù)據(jù)收集
        4.2.2 DNA和 RNA的提取及c DNA合成
        4.2.3 引物設(shè)計與合成
        4.2.4 實時熒光定量PCR(qPCR)
        4.2.5 拷貝數(shù)檢測與計算
        4.2.6 mRNA表達量檢測與計算
        4.2.7 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 引物雄性特異性檢驗
        4.3.2 標準曲線與引物效率
        4.3.3 綿羊ZNF280AY、ZNF280BY和 PRAMEY拷貝數(shù)評定
        4.3.4 ZNF280AY、ZNF280BY和 PRAMEY基因拷貝數(shù)變異的關(guān)系
        4.3.5 ZNF280AY、ZNF280BY和 PRAMEY基因拷貝數(shù)變異與湖羊睪丸大小相關(guān)指標的關(guān)聯(lián)分析
        4.3.6 ZNF280BY和 PRAMEY基因mRNA表達量與拷貝數(shù)及睪丸大小性狀的相關(guān)性分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
附錄
    附錄1 組織樣品總RNA的提取
    附錄2 PCR產(chǎn)物回收純化
    附錄3 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
    附錄4 綿羊ZNF280BY基因c DNA序列
    附錄5 綿羊ZNF280BY基因CDS序列
    附錄6 綿羊PRAMEY基因c DNA序列
    附錄7 綿羊PRAMEY基因CDS序列
在學期間的研究成果
致謝


【參考文獻】：
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本文編號：3201576