巴貝斯蟲是一種寄生于哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞的頂復(fù)門原蟲,病原體主要通過蜱叮咬、輸血、器官移植和胎盤垂直傳播。田鼠巴貝斯蟲是人病獸共患的巴貝斯蟲病,感染后導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解,黃疸,溶血性貧血,緩解性發(fā)熱和腎功能不全,死亡率為10%。巴貝斯蟲病被認(rèn)為是一種新發(fā)的威脅全球健康的疾病,但缺少高效方便的治療藥物,因此,需要研究藥物及其靶標(biāo)分子。巴貝斯蟲生活在富含氧的紅細(xì)胞中,產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）,會(huì)破壞生物大分子,為了抵消這種影響,寄生蟲自身存在一系列的抗氧化分子,如硫氧還蛋白,過氧化物氧化還原酶和超氧化物歧化酶等。為了研究抗氧化分子的藥物靶標(biāo)潛力,本實(shí)驗(yàn)室前期已經(jīng)克隆了過氧化物氧化還原酶prx1全長基因序列,并對(duì)其進(jìn)行了重組表達(dá),獲得了純化的重組蛋白,驗(yàn)證了其基本功能。本項(xiàng)研究將對(duì)該分子的關(guān)鍵活性位點(diǎn)進(jìn)行突變,研究其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。1.應(yīng)用q-PCR方法檢測小鼠感染后不同天數(shù)的巴貝斯蟲的prx1表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)prx1表達(dá)水平在感染的2-7d是緩慢增加的,第8d達(dá)到峰值后又迅速下降。表明該分子與感染過程密切相關(guān)。2.根據(jù)生物信息學(xué)分析,確定了prx1第50位半胱氨酸、第170位半胱氨酸的關(guān)鍵作用,設(shè)... 

【文章來源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 Prxs的分類和結(jié)構(gòu)
        1.1.1 Prxs的分類
        1.1.2 Prxs的結(jié)構(gòu)
    1.2 Prxs的功能
        1.2.1 硫氧還蛋白依賴性過氧化物酶活性
        1.2.2 分子伴侶活性
        1.2.3 Prxs作為過氧化物的傳感器和生物功能的調(diào)節(jié)劑
        1.2.4 Prxs作為炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)劑起作用
    1.3 各種寄生蟲Prxs的研究
        1.3.1 瘧原蟲
        1.3.2 弓形蟲
        1.3.3 血吸蟲
        1.3.4 巴貝斯蟲
        1.3.5 蜱
        1.3.6 大片吸蟲
    1.4 Prx相關(guān)抑制劑
        1.4.1 過氧化物酶功能抑制劑
        1.4.2 分子伴侶活性抑制劑
    1.5 小結(jié)
第2章 q-PCR檢測prx1 的相對(duì)表達(dá)水平
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 田鼠巴貝斯蟲的凍存與傳代
        2.3.2 蟲體的復(fù)蘇與傳代
        2.3.3 血涂片的制備
        2.3.4 q-PCR
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.5 討論
第3章 田鼠巴貝斯蟲Prxs氨基酸定點(diǎn)突變的質(zhì)粒構(gòu)建
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 Prx1 突變位點(diǎn)：cys50,cys170
        3.4.2 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 基因序列比對(duì)
        3.4.3 野生型、C50S、C170S、C50SC170S Prx1 氨基酸序列比對(duì)
    3.5 討論
第4章 田鼠巴貝斯蟲Prxs氨基酸C50S、C170S、C50SC170S蛋白的表達(dá)及鑒定
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 Wild/pet-30a、C50S/pet-30a、 C170S/pet-30a、 C50SC170S/pet-30a提取
        4.3.2 重組蛋白Wild、C50S、C170S、C50SC170S的表達(dá)及鑒定
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.5 討論
第5章 田鼠巴貝斯蟲Prxs氨基酸突變對(duì)抗氧化功能的影響
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 硫氰酸鐵法測Prx1 催化H2O2 實(shí)驗(yàn)
        5.3.2 質(zhì)粒保護(hù)實(shí)驗(yàn)
        5.3.3 抗氧化活性測定
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 硫酸氫鐵法催化過氧化氫
        5.4.2 MFO實(shí)驗(yàn)
    5.5 討論
第6章 田鼠巴貝斯蟲Prxs分子伴侶功能
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 Prx1的DNA分子伴侶功能
        6.3.2 Prx1 的蛋白分子伴侶功能
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.5 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
作者簡介
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3185232