發(fā)布時(shí)間：2021-03-10 01:54

　　實(shí)驗(yàn)旨在探究泛素蛋白酶體中羧基末端水解酶L3（UCH-L3）對(duì)牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和分化的影響。使用已經(jīng)建立的牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞體外成肌分化模型,體外模仿骨骼肌的發(fā)育過程,設(shè)計(jì)并合成UCH-L3的si-RNA,轉(zhuǎn)染牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,篩選出有顯著干擾效果的si-RNA。用EdU染色檢測(cè)干擾UCH-L3對(duì)細(xì)胞增殖的影響。用免疫熒光的方法檢測(cè)干擾UCH-L3表達(dá)后對(duì)肌管形成的影響,并采用Western blot技術(shù)檢測(cè)分化后分化標(biāo)志基因MyHC表達(dá)水平的變化,綜合分析干擾UCH-L3對(duì)牛肌衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化的影響。結(jié)果表明:干擾UCH-L3后肌衛(wèi)星細(xì)胞EdU染色陽(yáng)性率與對(duì)照組無(wú)明顯差異;干擾UCH-L3后分化形成肌管的數(shù)量少于對(duì)照組,肌管融合指數(shù)顯著低于對(duì)照組,分化標(biāo)志因子MyHC的蛋白水平顯著低于對(duì)照組。本研究結(jié)果表明,干擾UCH-L3的表達(dá)能夠抑制牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的成肌分化過程。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧雜志. 2020,56(11)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞轉(zhuǎn)染Si-UCH-L3后q RT-PCR檢測(cè)UCH-L3 RNA表達(dá)水平

用si-UCH-L3-3轉(zhuǎn)染牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，進(jìn)一步利用Western blot技術(shù)檢測(cè)si-UCH-L3-3干擾效果。如圖3所示，相比較si-NC組，實(shí)驗(yàn)組的UCH-L3在蛋白水平也顯著降低，說(shuō)明si-UCH-L3-3可用于進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。圖2 牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞轉(zhuǎn)染Si-UCH-L3后q RT-PCR檢測(cè)UCH-L3 RNA表達(dá)水平

牛骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞轉(zhuǎn)染干擾后UCH-L3表達(dá)的Western blot檢測(cè)


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