對青海省互助縣送檢的2份病死羊組織,經(jīng)細菌學厭氧分離培養(yǎng),參考已發(fā)表的產(chǎn)氣莢膜梭菌16S rRNA基因和毒素基因（α、β、ε、ι）合成引物,采用PCR和多重PCR擴增目的基因條帶,并對分離株細菌的16S rRNA基因序列進行了同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析。結(jié)果顯示:從其中1份病死羊組織中分離獲得1株β溶血型革蘭陽性桿菌,經(jīng)PCR和多重PCR擴增可得16S rRNA基因和α、ε毒素基因的目的條帶;分離株細菌的16S rRNA基因序列與GenBank上已登錄（登錄號:NR113204.1、NR121697.2）的產(chǎn)氣莢膜梭菌的相應序列具有高度同源性（≥99.0%）,同KU714939.1的遺傳關(guān)系最為親密,因此經(jīng)分子生物學方法鑒定分離株細菌為D型產(chǎn)氣莢膜梭菌。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)雜志. 2020,56(03)北大核心

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【部分圖文】：

圖3 分離株細菌牛乳“爆裂發(fā)酵”現(xiàn)象

分離株細菌和參考菌株D型產(chǎn)氣莢膜梭菌、E型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)α、β、ε、ι毒素基因多重PCR擴增,分離株細菌擴增可得α毒素基因(900 bp)和ε毒素基因(396 bp)的目的基因條帶,擴增結(jié)果如圖4所示。2.4 16S rRNA基因PCR擴增和同源性及系統(tǒng)發(fā)育分析

分離株細菌經(jīng)產(chǎn)氣莢膜梭菌16S rRNA基因PCR擴增,可得481 bp的目的基因條帶,擴增結(jié)果如圖5所示。對分離菌株細菌16S rRNA基因進行測序,測序結(jié)果顯示:分離株細菌的16S rRNA基因序列在線Blast分析顯示,其16S rRNA基因序列與GenBank上已登錄的(登錄號:NR113204.1、NR121697.2)產(chǎn)氣莢膜梭菌相應序列具有高度同源性(≥99.0%)。根據(jù)16S rRNA基因序列與上述同源性較高的D型產(chǎn)氣莢膜梭菌GenBank (登錄號:NR113204.1、NR121697.2)的相應序列和相關(guān)D型產(chǎn)氣莢膜梭菌(登錄號:LC386311.1、KU714939.1,來源見表2)建立系統(tǒng)進化樹,如圖6所示,分離株細菌與參考菌株分屬2個大的分支,其中分離株與其同源性較高的NR113204.1、NR121697.2處于一個小的分支,且分離株細菌同伊朗疫苗毒株(KU714939.1)的遺傳關(guān)系較為親密。表2 4株D型產(chǎn)氣莢膜梭菌參考菌株的名稱及來源Table 2 The name and source of a reference strain of Clostridium perfringens GenBank登錄號GenBank accession number 菌株Bacterial strain 地區(qū) Location 來源Source NR113204.1 Clostridium perfringens strain JCM 1290 日本 Japan 微生物采集中心Microbial collection center NR121697.2 Clostridium perfringens strain ATCC 13124 美國 America 人 Human being LC386311.1 Clostridium perfringens D strain Tokyo_Cp_TypeD 日本 Japan 山羊 Goat KU714939.1 Clostridium perfringens D strain CN409 伊朗 Iran 疫苗毒株 Vaccine strains


本文編號：3073749