豬GHSR基因的克隆及其突變體的藥理學特性初探
發(fā)布時間:2021-02-28 00:39
生長激素促分泌素受體(ghrelin receptor, GHSR)是一個由366個氨基酸組成的多肽,屬于G-蛋白偶連受體(GPCR)家族,擁有7次跨膜結(jié)構(gòu)。生長激素促分泌素是一種主要在胃部產(chǎn)生的含有28個氨基酸的多肽,該多肽被證實是GHSR的內(nèi)源性配體。研究表明GHSR在促進生長激素(growth hormone, GH)的分泌、調(diào)節(jié)攝食、能量代謝及胃腸運動和分泌等方面發(fā)揮重要作用。生長激素促分泌素對于調(diào)控豬的生長有重要意義,但對其研究僅限于GH分泌、胃腸活動、心血管功能和細胞增殖方面。在人類、魚和鳥類對生長激素促分泌素的研究中發(fā)現(xiàn)了許多其他生物學功能及其作用機制,但這些在豬上仍是未知的。因此,為進一步了解豬GHSR,本研究通過剪接重疊延伸聚合酶鏈式反應(SOE-PCR)克隆出豬GHSR的編碼區(qū)序列,插入真核表達載體pcDNA3.1(+)中,成功構(gòu)建了豬GHSR的真核表達載體。為更深入的了解豬GHSR功能,我們選取了6個突變位點即P108L、I134T、V1601、 C173R、A204D和F279L,通過單點突變得到這6個突變體,將這7個真核表達載體(pGHSR WT、P108L、...
【文章來源】:揚州大學江蘇省
【文章頁數(shù)】:63 頁
【學位級別】:碩士
【部分圖文】:
G蛋白偶聯(lián)受體示意圖
細胞內(nèi)的cAMP濃度升高。ATP環(huán)化酶由Gs激活而被Gi抑制。(2)磷脂酶C(PLC),它是以G蛋白為傳導物的一個重要的信號傳導途徑(見圖1-2)。PLC-P是G蛋白的直接效應器。胞外信號分子與細胞表面G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合,激活質(zhì)膜上的PLC-P,使質(zhì)膜上4,5-二憐酸磷脂酷肌醇(?1?2)水解產(chǎn)生1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)與二酷酰甘油(DAG)兩個第二信使。IP3與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的IP3配體門韓通道結(jié)合,開啟?丐通道,使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)C存的Ca2+迅速大量釋放到胞質(zhì)中
刺激GH的釋放[45](見圖1-3)。GHRH Ghrelin\ \ /GHRH.R^AMP I m # lCa2+]j r? Pituitary 歉 ^??gh|圖1-3生長激素促分泌素受體的作用機制l46lFig. 1-3 Mechanism of GHSR2.3.1激動劑傳統(tǒng)的配體被分為激動劑和措抗劑兩大類。激動劑與受體結(jié)合,具有內(nèi)在活性,從而激活信號傳導系統(tǒng),產(chǎn)生相應的生物學效應。激動劑能提高細胞信號轉(zhuǎn)導的水平。生長n
【參考文獻】:
期刊論文
[1]pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其在MCF-7乳腺癌細胞株中的表達[J]. 馬小斌,康華峰,包興,代志軍,刁巖,閔衛(wèi)利,王西京. 西安交通大學學報(醫(yī)學版). 2013(01)
[2]冷刺激不同時間仔豬3種組織HSP70表達的Western blot檢測分析[J]. 計紅,吳永魁,李士澤,楊煥民. 黑龍江八一農(nóng)墾大學學報. 2010(02)
[3]小鼠生長激素促分泌素受體真核表達載體的構(gòu)建及表達鑒定[J]. 王維剛,王志剛,邱文才,費照亮,費儉,鄭起. 中國普通外科雜志. 2009(05)
[4]胎盤生長因子PLGF在胃癌中的表達及其意義的初步研究[J]. 陳健,楊正府,何敖林,劉瑞文,胡雨佳,范然,周沁. 實用臨床醫(yī)藥雜志. 2008(11)
[5]黑皮質(zhì)素受體-4調(diào)節(jié)通路的研究進展[J]. 聶茹,巴彩鳳. 中國實驗動物學報. 2008(04)
[6]家鴨GHSR基因部分編碼序列的克隆及變異檢測[J]. 詹凱,許月英,趙瑞宏. 中國畜牧獸醫(yī). 2008(06)
[7]生長激素促分泌素受體及其內(nèi)源性配體ghrelin與胃腸運動[J]. 邱文才,王維剛,王志剛,鄭起. 中國普通外科雜志. 2007(10)
[8]應用western blotting檢測結(jié)直腸癌中FHIT蛋白的表達[J]. 胡義奎,段曉明,賀修勝,曹建國. 實用癌癥雜志. 2006(01)
[9]NisinZ的定點突變及突變體性質(zhì)的研究[J]. 袁靜,張振中,楊巍,陳秀珠,還連棟. 生物工程學報. 2003(02)
[10]定點突變對BPI23-Fcγ1重組抗菌蛋白表達和復性率的影響[J]. 安云慶,柯巖,靖學芳,楊貴貞. 首都醫(yī)科大學學報. 2002(03)
本文編號:3055041
【文章來源】:揚州大學江蘇省
【文章頁數(shù)】:63 頁
【學位級別】:碩士
【部分圖文】:
G蛋白偶聯(lián)受體示意圖
細胞內(nèi)的cAMP濃度升高。ATP環(huán)化酶由Gs激活而被Gi抑制。(2)磷脂酶C(PLC),它是以G蛋白為傳導物的一個重要的信號傳導途徑(見圖1-2)。PLC-P是G蛋白的直接效應器。胞外信號分子與細胞表面G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合,激活質(zhì)膜上的PLC-P,使質(zhì)膜上4,5-二憐酸磷脂酷肌醇(?1?2)水解產(chǎn)生1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)與二酷酰甘油(DAG)兩個第二信使。IP3與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的IP3配體門韓通道結(jié)合,開啟?丐通道,使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)C存的Ca2+迅速大量釋放到胞質(zhì)中
刺激GH的釋放[45](見圖1-3)。GHRH Ghrelin\ \ /GHRH.R^AMP I m # lCa2+]j r? Pituitary 歉 ^??gh|圖1-3生長激素促分泌素受體的作用機制l46lFig. 1-3 Mechanism of GHSR2.3.1激動劑傳統(tǒng)的配體被分為激動劑和措抗劑兩大類。激動劑與受體結(jié)合,具有內(nèi)在活性,從而激活信號傳導系統(tǒng),產(chǎn)生相應的生物學效應。激動劑能提高細胞信號轉(zhuǎn)導的水平。生長n
【參考文獻】:
期刊論文
[1]pcDNA3.1(+)/caveolin-1真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其在MCF-7乳腺癌細胞株中的表達[J]. 馬小斌,康華峰,包興,代志軍,刁巖,閔衛(wèi)利,王西京. 西安交通大學學報(醫(yī)學版). 2013(01)
[2]冷刺激不同時間仔豬3種組織HSP70表達的Western blot檢測分析[J]. 計紅,吳永魁,李士澤,楊煥民. 黑龍江八一農(nóng)墾大學學報. 2010(02)
[3]小鼠生長激素促分泌素受體真核表達載體的構(gòu)建及表達鑒定[J]. 王維剛,王志剛,邱文才,費照亮,費儉,鄭起. 中國普通外科雜志. 2009(05)
[4]胎盤生長因子PLGF在胃癌中的表達及其意義的初步研究[J]. 陳健,楊正府,何敖林,劉瑞文,胡雨佳,范然,周沁. 實用臨床醫(yī)藥雜志. 2008(11)
[5]黑皮質(zhì)素受體-4調(diào)節(jié)通路的研究進展[J]. 聶茹,巴彩鳳. 中國實驗動物學報. 2008(04)
[6]家鴨GHSR基因部分編碼序列的克隆及變異檢測[J]. 詹凱,許月英,趙瑞宏. 中國畜牧獸醫(yī). 2008(06)
[7]生長激素促分泌素受體及其內(nèi)源性配體ghrelin與胃腸運動[J]. 邱文才,王維剛,王志剛,鄭起. 中國普通外科雜志. 2007(10)
[8]應用western blotting檢測結(jié)直腸癌中FHIT蛋白的表達[J]. 胡義奎,段曉明,賀修勝,曹建國. 實用癌癥雜志. 2006(01)
[9]NisinZ的定點突變及突變體性質(zhì)的研究[J]. 袁靜,張振中,楊巍,陳秀珠,還連棟. 生物工程學報. 2003(02)
[10]定點突變對BPI23-Fcγ1重組抗菌蛋白表達和復性率的影響[J]. 安云慶,柯巖,靖學芳,楊貴貞. 首都醫(yī)科大學學報. 2002(03)
本文編號:3055041
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