�、鲂头置谙到y(tǒng)（Type VI secretion system, T6SS）是新近發(fā)現(xiàn)的存在于革蘭氏陰性菌變形菌門部分致病菌中的一種蛋白質分泌系統(tǒng),是這類細菌的一種重要毒力因子。T6SS是由15-25個基因編碼的蛋白形成的貫穿細菌“內膜-周質空間-外膜”的跨膜復合結構,其形成的管道能直接穿過靶細胞的生物膜發(fā)揮生物學效應,作用的靶細胞既可以是原核細胞,也可以是真核細胞。溶血素共調節(jié)蛋白（Hemolysin-Coregulated Protein, Hcp）是形成T6SS分泌裝置的通道的結構蛋白,同時也是對靶細胞產(chǎn)生生物學效應的重要的效應蛋白,被認為是T6SS的分子標志（hallmark）。腸外致病性大腸桿菌（Extraintestinal pathogenic Escherichia coli, ExPEC）是類重要的人畜共患傳染病病原,能引起人和動物腸道以外多種組織器官病變。近年來,許多豬場發(fā)生腦膜炎、肺炎、關節(jié)炎、敗血癥等疾病的豬只ExPEC的分離率呈上升趨勢,這類菌株往往具有較強的耐藥性,給養(yǎng)殖場疾病的防控帶來很大的困難,同時造成養(yǎng)殖場較大的損失。本研究在前期對5株豬源ExPEC進... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
1 文獻綜述
    1.1 革蘭氏陰性菌蛋白質分泌系統(tǒng)的概述
    1.2 Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進展
        1.2.1 Ⅵ型分泌系統(tǒng)的概述
        1.2.2 Ⅵ型分泌系統(tǒng)分子結構的研究進展
        1.2.3 Ⅵ型分泌系統(tǒng)功能的研究進展
        1.2.4 大腸桿菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進展
    1.3 腸外致病性大腸桿菌的研究進展
2 研究目的與意義
3 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 菌株、質粒、細胞
        3.1.2 酶及其它試劑
        3.1.3 主要培養(yǎng)基及試劑配制
        3.1.4 試驗動物
        3.1.5 PCR引物
    3.2 方法
        3.2.1 細菌培養(yǎng)與分子生物學基本操作
        3.2.2 腸外致病性大腸桿菌Hcp1多克隆抗體的制備
        3.2.3 腸外致病性大腸桿菌分泌蛋白的提取及Hcp1蛋白的鑒定
        3.2.4 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3的構建
        3.2.5 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3生長曲線的繪制
        3.2.6 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3肺泡巨噬細胞吞噬存活試驗
        3.2.7 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3對PK15細胞粘附與入侵試驗
        3.2.8 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3對小鼠的毒力試驗
4 結果與分析
    4.1 腸外致病性大腸桿菌T6SS基因序列分析
    4.2 腸外致病性大腸桿菌Hcp1多克隆抗體的制備
        4.2.1 hcp1基因的克隆
        4.2.2 原核表達質粒pET30a-hcp1的鑒定
        4.2.3 Hcp1蛋白原核表達與純化的鑒定
        4.2.4 Hcp1多克隆抗體的鑒定
    4.3 腸外致病性大腸桿菌分泌蛋白中Hcp1蛋白的鑒定
    4.4 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3的構建
    4.5 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3生長曲線
    4.6 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3的抗吞噬能力
    4.7 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3對上皮細胞粘附與入侵的能力
    4.8 腸外致病性大腸桿菌缺失突變株PCN033Δhcp3對小鼠的毒力
5 討論
6 結論
參考文獻
附錄-個人簡歷
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]細菌蛋白分泌途徑的研究進展[J]. 訾禎禎,楊志偉.  生物技術通報. 2011(08)
[2]細菌Ⅵ型分泌系統(tǒng)的研究進展[J]. 李俊,俞盈,王豪舉.  微生物學報. 2011(03)
[3]豬高熱綜合征的發(fā)生與流行概況[J]. 楊漢春.  豬業(yè)科學. 2007(01)
[4]我國南方豬高熱病的研究（Ⅰ）——大腸桿菌的分離、鑒定和致病性測定[J]. 寧宜寶,鄭杰,張純萍,宋立,劉惠文,王琴,丘惠深,丘伯根,趙啟祖,沈青春,劉業(yè)兵,范學政,徐璐,江煥賢.  中國獸藥雜志. 2006(12)
[5]非經(jīng)典的蛋白質分泌途徑[J]. 劉剛,王清明,陳惠鵬.  生物技術通訊. 2005(01)



本文編號：3055015