禽戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）是雞大肝大脾（Big liver and spleendisease，BLS）病或肝炎脾大（Hepatitis-Splenomegaly，HS）綜合癥的主要病原，主要引起30-72周齡的蛋雞和肉種雞的死淘率升高和產(chǎn)蛋率下降（20-40%），發(fā)病雞通常腹部充血，卵巢退化，肝臟脂肪或淀粉樣變性，偶有肝脾腫大。該病曾給澳大利亞的養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而我國(guó)也時(shí)有該病爆發(fā)的報(bào)道。禽HEV與人、豬HEV同屬于肝炎病毒屬，為無囊膜，單股正鏈RNA病毒，其基因組全長(zhǎng)約為6.6kb，比哺乳動(dòng)物HEV基因組全長(zhǎng)少600bp左右，包含5’帽子和3’PolyA結(jié)構(gòu)，含有3個(gè)開放閱讀框（Open reading frame，ORF），分別為ORF1、ORF2和ORF3。其中ORF2基因編碼衣殼蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，并且包含病毒主要的抗原表位。本研究以獸醫(yī)免疫生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離的禽HEV中國(guó)分離株（CaHEV）為材料基礎(chǔ)，利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建和表達(dá)CaHEV ORF2蛋白C端268個(gè)氨基酸，純化后獲得蛋白ORF2-268，將該蛋白作為包被抗原... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 戊型肝炎的研究進(jìn)展
        1.1.1 戊型肝炎病毒病原學(xué)研究
        1.1.2 戊型肝炎病毒基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.3 戊型肝炎病毒宿主范圍
        1.1.4 戊型肝炎的流行病學(xué)
        1.1.5 戊型肝炎的臨床表現(xiàn)
        1.1.6 戊型肝炎病毒的檢測(cè)方法
        1.1.7 戊型肝炎病毒疫苗的研究
    1.2 禽戊型肝炎病毒研究概況
        1.2.1 禽戊型肝炎病毒病原學(xué)
        1.2.2 禽戊型肝炎病毒流行病學(xué)
        1.2.3 禽戊型肝炎病毒免疫學(xué)
    1.3 本研究的目的及意義
第二章 間接 ELISA 檢測(cè)禽 HEV 抗體方法的建立
    2.1 材料
        2.1.1 毒株，載體與菌種
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        2.1.3 主要設(shè)備和儀器
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 設(shè)計(jì)和合成引物
        2.2.2 獲得目的基因并測(cè)序
        2.2.3 帶有酶切位點(diǎn)引物的設(shè)計(jì)
        2.2.4 目的基因和載體的雙酶切
        2.2.5 篩選陽性克隆
        2.2.6 表達(dá)和純化蛋白
        2.2.7 敲定最終的間接 ELISA 檢測(cè)血清方法
        2.2.8 建立 ELISA 方法的重復(fù)性分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 鑒定重組質(zhì)粒
        2.3.2 優(yōu)化重組蛋白表達(dá)條件
        2.3.3 Western blot 鑒定表達(dá)的重組蛋白
        2.3.4 純化蛋白
        2.3.5 建立間接 ELISA 方法檢測(cè)血清抗體
    2.4 討論與分析
第三章 我國(guó)雞群戊型肝炎的血清學(xué)檢測(cè)
    3.1 材料
        3.1.1 雞血清
        3.1.2 ELISA 檢測(cè)抗原
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        3.1.4 儀器和設(shè)備
        3.1.5 配制試劑
    3.2 方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 不同省市雞群禽 HEV抗體檢測(cè)結(jié)果
        3.3.2 不同品種雞群禽 HEV抗體檢測(cè)結(jié)果
        3.3.3 不同周齡雞群禽 HEV抗體檢測(cè)結(jié)果
    3.4 討論和分析
第四章 我國(guó)雞群的戊型肝炎病毒分子流行病學(xué)調(diào)查
    4.1 材料
        4.1.1 表達(dá)載體和菌種
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        4.1.3 主要設(shè)備和儀器
        4.1.4 主要試劑的配制
        4.1.5 檢測(cè)樣品的收集
    4.2 方法
        4.2.1 設(shè)計(jì)引物
        4.2.2 Trizol 方法提取病毒 RNA
        4.2.3 RT-PCR檢測(cè)
        4.2.4 回收并純化 PCR產(chǎn)物
        4.2.5 連接至載體
        4.2.6 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        4.2.7 轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物
        4.2.8 提質(zhì)粒
        4.2.9 雙酶切鑒定
        4.2.10 比對(duì)序列
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        4.3.2 雙酶切鑒定克隆質(zhì)粒
        4.3.3 與 GenBank 上已知序列的同源性關(guān)系
        4.3.4 進(jìn)化樹分析
    4.4 討論和分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介、發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
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