本文關(guān)鍵詞：犬源偽狂犬病毒的分離鑒定及其血清學(xué)調(diào)查，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本試驗(yàn)從江西省南昌市2所寵物醫(yī)院收集到疑似偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染的病犬2例,經(jīng)剖檢和病理學(xué)分析后對其進(jìn)行PCR檢測,并利用體外和體內(nèi)試驗(yàn)對其中1毒株進(jìn)行分離鑒定,同時研究兩毒株毒力基因gD和gE的分子特征和進(jìn)化關(guān)系。此外,本試驗(yàn)還對南昌市區(qū)域內(nèi)的犬只進(jìn)行偽狂犬(Pseudorabies,PR)的血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果如下:1成功從2例犬大腦組織中擴(kuò)增出大小為346 bp的PRVg E部分基因,并將兩毒株分別命名為PRV JX-1-2014株和JX-2-2015株。感染的PK-15細(xì)胞在電鏡下可觀察到實(shí)心和中空兩種特征的PRV粒子。利用PK-15細(xì)胞測得該毒株的TCID50為10-4/0.1mL。利用JX-1-2014株接種成年家兔后呈現(xiàn)典型的PR癥狀;2成功擴(kuò)增出大小分別為1208 bp和1770 bp的PRVgD和gE基因。將兩江西株與國內(nèi)外PRV毒株進(jìn)行比對得知:兩毒株均出現(xiàn)了一定程度的變異,其與國外株的親緣關(guān)系較遠(yuǎn),而與國內(nèi)株的親緣關(guān)系較近,其中與國內(nèi)2011年之后出現(xiàn)的毒株更為親近;3血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,調(diào)查的犬只有PRV抗體和PRVgE抗體陽性存在,其中PRV抗體總陽性率36.8%(74/201)。結(jié)論:病犬確為PRV感染且所分離毒株存在一定程度的變異,目前南昌市轄區(qū)存在犬PRV流行的風(fēng)險。
【關(guān)鍵詞】：犬 偽狂犬 病毒 基因 血清學(xué)調(diào)查
【學(xué)位授予單位】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.65
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-10
• 第一章 偽狂犬病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展10-16
• 1 犬偽狂犬病10-13
• 1.1 流行病學(xué)10
• 1.2 犬偽狂犬病的臨床癥狀10-11
• 1.3 犬偽狂犬病的病理學(xué)11
• 1.4 犬偽狂犬病的診斷11-13
• 1.4.1 一般檢查11
• 1.4.2 血液學(xué)檢查11-12
• 1.4.3 病毒的分離鑒定12
• 1.4.4 動物接種試驗(yàn)12
• 1.4.5 PCR、熒光定量PCR和LAMP12
• 1.4.6 血清學(xué)試驗(yàn)12-13
• 2 偽狂犬病毒的分子生物學(xué)特性13-15
• 2.1 病原13-14
• 2.1.1 病毒分類地位13
• 2.1.2 病毒粒子結(jié)構(gòu)13
• 2.1.3 病毒理化特性13-14
• 2.2 PRV分子生物學(xué)研究14-15
• 2.2.1 PRV基因組14
• 2.2.2 PRV糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能14-15
• 3 本研究的目的與意義15-16
• 第二章 病例報告16-21
• 1 病例一16-17
• 2 病例二17-20
• 3 病例總結(jié)20-21
• 第三章 犬源偽狂犬病毒江西株的分離與鑒定21-32
• 1 材料與方法21-25
• 1.1 待檢病料21
• 1.2 細(xì)胞株21
• 1.3 主要生化試劑21-22
• 1.4 主要儀器設(shè)備22
• 1.5 常用試劑的配制22-23
• 1.6 引物設(shè)計與合成23
• 1.7 犬腦組織DNA的提取23
• 1.8 PCR鑒定23
• 1.9 病毒分離23-24
• 1.10 動物接種試驗(yàn)24
• 1.11 細(xì)胞培養(yǎng)24
• 1.11.1 細(xì)胞復(fù)蘇24
• 1.11.2 細(xì)胞凍存24
• 1.12 病毒感染細(xì)胞24
• 1.13 PRV TCID_(50)的測定24
• 1.14 病毒的鑒定24-25
• 1.14.1 細(xì)胞CPE24-25
• 1.14.2 培養(yǎng)細(xì)胞的PCR鑒定25
• 1.14.3 感染細(xì)胞超薄切片的制作25
• 2 結(jié)果與分析25-29
• 2.1 病毒PCR鑒定結(jié)果25-26
• 2.2 動物接種試驗(yàn)26-27
• 2.3 病毒的分離及鑒定27-29
• 2.3.1 細(xì)胞CPE27
• 2.3.2 培養(yǎng)細(xì)胞的PCR鑒定27-28
• 2.3.3 感染細(xì)胞的電鏡觀察28-29
• 2.4 病毒TCID_(50)的測定29
• 3 討論29-31
• 4 小結(jié)31-32
• 第四章 犬源偽狂犬病毒江西株g D、g E基因的克隆與測序分析32-49
• 1 材料與方法32-35
• 1.1 主要生化試劑32
• 1.2 主要儀器設(shè)備32
• 1.3 常用試劑的配制32-33
• 1.4 引物設(shè)計33
• 1.5 PRV DNA模板的制備33
• 1.6 毒力基因的PCR擴(kuò)增33
• 1.7 目的片段的克隆33-34
• 1.7.1 PCR產(chǎn)物的回收33-34
• 1.7.2 目的片段與克隆載體的連接34
• 1.8 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化34-35
• 1.8.1 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化34
• 1.8.2 陽性菌落的篩選、鑒定34
• 1.8.3 重組質(zhì)粒的提取34-35
• 1.8.4 目的片段測序和序列分析35
• 2 結(jié)果與分析35-46
• 2.1 PRV江西株g D基因的PCR擴(kuò)增35
• 2.2 PRV江西株g E基因的PCR擴(kuò)增35
• 2.3 PRV江西株g D基因分析35-40
• 2.3.1 PRV江西株g D基因核苷酸及編碼的氨基酸序列分析35-39
• 2.3.2 PRVg D基因遺傳進(jìn)化分析39-40
• 2.4 PRV江西株g E基因分析40-46
• 2.4.1 PRV江西株g E基因核苷酸及編碼的氨基酸序列分析40-44
• 2.4.2 PRVg E基因遺傳進(jìn)化分析44-46
• 3 討論46-48
• 4 小結(jié)48-49
• 第五章 犬源偽狂犬病毒的血清學(xué)調(diào)查49-53
• 1 材料與方法49-50
• 1.1 血清樣品49
• 1.2 主要生化試劑49-50
• 1.3 主要儀器50
• 1.4 ELISA檢測50
• 2 結(jié)果與分析50
• 3 討論50-52
• 4 小結(jié)52-53
• 全文總結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 附錄58-62
• 致謝62-63
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文63

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1 賀曉龍;韓志輝;;青海省牛傳染性鼻氣管炎血清學(xué)調(diào)查[J];青海大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2009年01期

2 梁梧生,練幼輝,周德久,李華,鐘光六,陳統(tǒng)球;正常樹，

本文編號：273800