【摘要】：多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料富含益生菌,且具有多種有益代謝產(chǎn)物,研究和實踐已證明其能有效提高動物的健康水平,目前提高發(fā)酵飼料的發(fā)酵效果已成為相關領域的研究熱點。此外,研究證實多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料能有效提高動物的腸黏膜屏障功能,其富含的益生菌、短鏈脂肪酸(SCFA)等單獨作用時能有效抵抗沙門氏菌感染,因此推測多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料具有抗沙門氏菌感染的作用。綜上所述,本文預先探究酸性蛋白酶和非淀粉多糖酶(non-starch-polysaccharides enzyme,NSP酶)對多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料發(fā)酵效果的影響,探究最佳添加量,在此基礎上分析多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料在發(fā)酵過程中功能性成分和體外抑菌性能的變化及其對肉雞抗沙門氏菌感染能力的影響,以期為多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料的運用提供思路和理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容如下:首先,在制備多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料時加入不同劑量的酸性蛋白酶和NSP酶,從菌落總數(shù)、代謝產(chǎn)物、體外抗氧化活性這三方面綜合評價這兩種酶對發(fā)酵效果的影響,并探究最佳添加量。結果顯示,酸性蛋白酶和NSP酶均能顯著提高多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料的發(fā)酵效果。其中酸性蛋白酶的最佳添加量為0.4 g/kg,NSP酶的最佳添加量為0.15 g/kg,酸性蛋白酶的提高效果顯著優(yōu)于NSP酶,因此添加0.4 g/kg酸性蛋白酶進行后續(xù)實驗。接著,分析多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料在發(fā)酵過程中功能性成分和抑菌性能的變化。結果顯示,飼料經(jīng)發(fā)酵后,pH顯著降低,益生菌菌落總數(shù)、總酸、氨基酸態(tài)氮、SCFA、小肽含量顯著上升,體外抗氧化能力顯著增強,乳酸鏈菌素Z(Nisin Z)和抑菌活性從無到有,并隨著時間的延長呈現(xiàn)上升趨勢。最后,探究多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料對肉雞抗沙門氏菌感染能力的影響:將50只1日齡肉雞隨機分為5組:正常組(基礎日糧+10%未發(fā)酵飼料)、模型組(基礎日糧+10%未發(fā)酵飼料)、抗生素組(基礎日糧+10%未發(fā)酵飼料+20 mg/kg硫酸黏桿菌素)、5%發(fā)酵組(基礎日糧+5%未發(fā)酵飼料+5%發(fā)酵飼料)、10%發(fā)酵組(基礎日糧+10%發(fā)酵飼料)。于肉雞13日齡時,除正常組外均口腔灌服400μL沙門氏菌(10~9 CFU/m L)連續(xù)兩天,正常組灌服等量無菌水,模型組出現(xiàn)明顯腹瀉。于肉雞15日齡時進行屠宰實驗,從炎癥反應、氧化應激、腸黏膜屏障功能這三方面評價多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料對沙門氏菌感染肉雞的影響。結果顯示,(1)多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料和硫酸黏桿菌素能夠通過抑制因沙門氏菌感染引起的TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的激活,降低促炎因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平和mRNA相對表達量。5%發(fā)酵組、10%發(fā)酵組的抑炎因子(IL-4、IL-10)水平和mRNA相對表達量顯著高于其余三組,表明多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料能夠提高抑炎因子水平和mRNA相對表達量。10%發(fā)酵組和抗生素組的MPO活性顯著低于模型組。綜上所述,多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料改善因沙門氏菌感染導致的炎癥反應,總體而言,10%發(fā)酵組的炎癥改善情況接近抗生素組并優(yōu)于5%發(fā)酵組;(2)多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料和硫酸黏桿菌素均能夠改善因沙門氏菌感染導致的肉雞血清和結腸組織T-AOC、抗氧化酶(T-SOD、CAT、GSH-Px)活力顯著下降,丙二醛(MDA)含量顯著上升的現(xiàn)象,總體而言,5%發(fā)酵組、10%發(fā)酵組的抗氧化指標優(yōu)于抗生素組;(3)沙門氏菌感染導致肉雞結腸組織形態(tài)受損,血清LPS、D-LA水平顯著上升,結腸SIgA水平顯著下降,緊密連接蛋白(ZO-1、Claudin-1、Occludin)和黏蛋白MUC2 mRNA相對表達量顯著下降,β-防御素(AVBD-6、AVBD-9)mRNA相對表達量異常上升,表明沙門氏菌感染會破壞腸黏膜屏障。而多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料和硫酸黏桿菌素能夠改善這些指標,減輕腸黏膜屏障的破壞程度,總體而言,10%發(fā)酵組的腸黏膜屏障功能與抗生素組接近,并優(yōu)于5%發(fā)酵組。綜上所述,酸性蛋白酶和NSP酶均能提高多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料的發(fā)酵效果,其中酸性蛋白酶的最佳添加量為0.4 g/kg,NSP酶的最佳添加量為0.15 g/kg,酸性蛋白酶的提高效果優(yōu)于NSP酶;飼料經(jīng)發(fā)酵后功能性成分增多,并顯現(xiàn)抑菌性能;多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料能夠改善因沙門氏菌感染導致的炎癥、氧化應激、腸黏膜屏障受損,且10%多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料的改善效果優(yōu)于5%發(fā)酵飼料,并與20 mg/kg硫酸黏桿菌素效果接近。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S816.6
【圖文】：

地給結腸癌小鼠飼喂益生菌 VSL#3 可以有效抑現(xiàn)乳桿菌分泌的蛋白酶可以降解促炎因子，從而抑40]發(fā)現(xiàn)發(fā)酵產(chǎn)物乙酸鹽可以有效組織細菌移位，防菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料富含益生菌和代謝產(chǎn)物，推測其和 TLR4 信號通路（tolllike receptor，TLRs）是一類在進化中比較保識別各種微生物的病原相關分子模式（pathogenas如脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、磷壁酸（teic的激活和傳遞，引起炎癥介質(zhì)的釋放。其中由 TL 88（myeloid differentiation factor88，MyD88）及核因已被證實在介導革蘭氏陰性菌（致病成分 LPS）感因此，沙門氏菌、大腸桿菌等革蘭氏陰性菌感染與體抵抗病原菌感染研究方面的熱點問題。

還原反應是生物體內(nèi)最基本最重要的生理反應。動物體在進行有氧代謝時自由基（reactive oxygen Species，ROS），同時機體自身的抗氧化防御系統(tǒng)S。在正常的生理狀態(tài)下，ROS 的生成和清除處于一個動態(tài)平衡狀態(tài)[48]。界的有害刺激時，會產(chǎn)生大量 ROS，當 ROS 的生成能力超過其清除能力在體內(nèi)積累，導致氧化應激并破壞抗氧化防御系統(tǒng)，進而造成多種生物大發(fā)疾病，疾病的病理過程又往往會進一步擊潰機體的抗氧化防御系統(tǒng)，對重的損傷。表明，沙門氏菌等病原菌的感染會導致腸道的炎癥灶內(nèi)巨噬細胞在吞噬、過程中引起呼吸爆發(fā)，產(chǎn)生大量 ROS，導致腸道氧化應激[49]。而氧化應膜屏障功能的關鍵因素之一，因為 ROS 會通過損傷腸黏膜屏障的關鍵蛋壞腸上皮細胞，引起腸黏膜屏障功能受損[50]。腸黏膜屏障功能一旦受損，移位，細菌分泌物等有害物質(zhì)進入血液循環(huán)，引起全身氧化應激，從而對的損傷。大量研究表明益生菌及多種發(fā)酵產(chǎn)物如胞外多糖、丁酸等均具有, 52]，提示多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料或許也可以提高沙門氏菌感染肉雞的抗氧化氏菌感染與腸黏膜屏障

【參考文獻】

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本文編號：2734651