【摘要】：微小隱孢子蟲(chóng)(Cryptosporidium parvum)是一種重要的人獸共患腸道原蟲(chóng),是造成免疫功能缺陷的人和畜禽嚴(yán)重腹瀉甚至死亡的重要病因之一。然而,目前尚無(wú)有效的藥物和疫苗用于防控隱孢子蟲(chóng)的感染。研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可通過(guò)調(diào)節(jié)宿主基因的表達(dá)在多種癌癥、寄生蟲(chóng)病、病毒病和細(xì)菌病中發(fā)揮重要作用。但是,lncRNA在隱孢子蟲(chóng)感染中的作用尚不明確�；诖�,本研究利用lncRNA表達(dá)譜芯片鑒定了C.parvum感染的HCT-8細(xì)胞的lncRNA和mRNA表達(dá)譜,并利用干擾和過(guò)表達(dá)技術(shù)探討了顯著下調(diào)表達(dá)的lncRNA BACE1-AS對(duì)C.parvum增殖的影響。1.獲得了C.parvum感染HCT-8細(xì)胞的mRNA表達(dá)譜:C.parvum感染24 h的HCT-8細(xì)胞共檢測(cè)到20663個(gè)mRNA的表達(dá),其中1349個(gè)mRNA差異表達(dá)(倍數(shù)1.2,P0.05),包括535個(gè)上調(diào)表達(dá)和814個(gè)下調(diào)表達(dá)的mRNA;隨機(jī)選擇10個(gè)顯著差異表達(dá)的mRNA(5個(gè)上調(diào)和5個(gè)下調(diào))進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)其結(jié)果與芯片結(jié)果趨勢(shì)一致;功能預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),這些差異表達(dá)的mRNA主要富集于與隱孢子蟲(chóng)感染相關(guān)的通路,如Wnt信號(hào)通路、緊密連接和hedgehog信號(hào)通路等。2.獲得了C.parvum感染HCT-8細(xì)胞的lncRNA表達(dá)譜:C.parvum感染24 h的HCT-8細(xì)胞共檢測(cè)到16203個(gè)lncRNA的表達(dá),其中821個(gè)lncRNA(倍數(shù)1.2,P0.05)顯著差異表達(dá),包括557個(gè)上調(diào)表達(dá)和264個(gè)下調(diào)表達(dá)的lncRNA;對(duì)其進(jìn)行類(lèi)型分析發(fā)現(xiàn),這些差異表達(dá)的lncRNA隸屬于5種類(lèi)型,包括22個(gè)正義lncRNA、280個(gè)反義lncRNA、44個(gè)雙向lncRNA、33個(gè)內(nèi)含子lncRNA和312個(gè)基因間lncRNA;隨機(jī)選擇11個(gè)顯著差異表達(dá)的lncRNA(5個(gè)上調(diào)和6個(gè)下調(diào))進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)其結(jié)果與芯片結(jié)果一致;共表達(dá)和靶基因分析發(fā)現(xiàn),29個(gè)lncRNA順式調(diào)節(jié)27個(gè)mRNA,114個(gè)lncRNA反式調(diào)節(jié)109個(gè)mRNA;功能預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),差異表達(dá)lncRNA的靶基因主要參與hedgehog信號(hào)通路、緊密連接和Wnt信號(hào)通路等。3.初步闡明了lncRNA BACE1-AS對(duì)C.parvum增殖的影響:C.parvum感染引起了lncRNA BACE1-AS的顯著下調(diào),并且其表達(dá)在不同感染劑量(蟲(chóng)體:細(xì)胞=1.125:1、2.25:1、4.5:1)及不同感染時(shí)間(8 h、12 h、24 h和48 h)均顯著低于未感染對(duì)照組;在HCT-8細(xì)胞中過(guò)表達(dá)BACE1-AS 24 h后感染C.parvum發(fā)現(xiàn),細(xì)胞中隱孢子蟲(chóng)HSP70基因的表達(dá)顯著低于空載體(pcDNA3.1)轉(zhuǎn)染對(duì)照組;在利用siRNA(siBACE1-AS)干擾BACE1-AS表達(dá)的HCT-8細(xì)胞感染C.parvum發(fā)現(xiàn),隱孢子蟲(chóng)HSP70基因的表達(dá)顯著高于轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)siRNA(si-NC)組。綜上所述,C.parvum感染引起了HCT-8細(xì)胞lncRNA和mRNA表達(dá)譜的改變,顯著下調(diào)的lncRNA BACE1-AS可以抑制C.parvum在HCT-8細(xì)胞中的增殖。這些研究結(jié)果初步揭示了宿主lncRNA在隱孢子蟲(chóng)感染中的作用,為開(kāi)發(fā)防控隱孢子蟲(chóng)病的疫苗和藥物提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S855.9

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本文編號(hào)：2729447