【摘要】：初情期是動物從幼年向獲得繁殖能力的過渡時期,也是雌性動物初次發(fā)情并排卵的時期,象征著母畜具備了繁衍生息的能力。以往關于初情期的研究多集中在嚙齒類和靈長類動物,因其機制較為復雜,目前研究尚不完善。本研究利用F-MSAP技術和BSP方法雙結合的思路探索DNA甲基化對母羊初情期啟動關鍵基因在下丘腦表達的影響。研究結果如下:1、在初情期啟動的三個發(fā)育階段中共發(fā)現(xiàn)了2409個條帶,且主要集中于21-309bp。初情期前和臨近初情期階段以全甲基化模式為主,初情期階段以半甲基化模式為主。初情期啟動時下丘腦的總體甲基化水平為34.20%,顯著低于臨近初情期(61.96%)階段,P0.05。表明,在母羊初情期啟動前后,DNA甲基化的模式和水平存在顯著差異。2、在初情期發(fā)育過程中,NKB基因在母羊下丘腦中有表達,且隨著初情期的發(fā)育,NKB基因表達量逐漸升高,且初情期和臨近初情期顯著高于初情前期階段。3、隨著初情期的啟動,NKB啟動子區(qū)總體甲基化水平顯著降低,初情期總體甲基化水平與臨近初情期階段差異不顯著;啟動子區(qū)特定位點(-1261、-1254和-836bp)甲基化水平顯著降低。本研究表明,基因組DNA甲基化和NKB基因發(fā)生甲基化是影響母羊初情期啟動的重要因素。
【圖文】：

3 號 0.262 0 4 號 0.272 0 5 號 0.286 0 1 號 2 號 3 號 4 號 5 號 1 號 2 號0.7390.7970.7860.7920.8031.0901.1060000010 3 號 1.107 1 4 號 1.094 1 5 號 1.107 1組織基因組 DNA 提取結果組織基因組 DNA 用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。由于月齡 5 只羊，每只羊兩個對照組，樣本量較多，所以譜來呈現(xiàn)。結果見圖 1。并測定 OD 值，，結果見表 9

符合 F-MSAP 要求可供后續(xù)實驗使用。 雙酶切結果結果見圖 2，H 組和 M 組條帶非常均勻、清晰，無明顯單獨片段，證分、效果良好，為提高后續(xù)預擴增以及選擇性擴增效率奠定基礎。 預擴增結果將連接接頭后的產物進行 20 倍稀釋，作為模板進行預擴增。1%瓊脂糖后，結果見圖 3。條帶集中在 500bp 以下，并且均勻清晰，符合選擇性求。
【學位授予單位】：吉林農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S826

【參考文獻】

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1 韓威;李慧芳;朱云芬;宋遲;徐文娟;;GnRH依賴型性早熟遺傳調控系統(tǒng)研究進展[J];家畜生態(tài)學報;2013年01期

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1 胡雅岑;DNA甲基化在帕金森病發(fā)病機制中的研究[D];中南大學;2012年

本文編號：2689764