【摘要】：豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起豬圓環(huán)病毒病(porcine circovirus associated diseases,PCVAD)的主要病原,自1997年被首次分離以來(lái),已成為繼豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)后又一致豬免疫抑制的病毒,呈出全球流行,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失。2000年我國(guó)出現(xiàn)了 PCV2的相關(guān)報(bào)道,此后PCV2所引發(fā)的感染和疾病一直高居不下,對(duì)該病的診斷和防治具有重要的意義。本文通過(guò)對(duì)江蘇部分地區(qū)病死豬的病料進(jìn)行PCV2的檢測(cè),為該地區(qū)PCVAD流行病學(xué)提供參考。當(dāng)前對(duì)PCVAD的防制手段主要是接種疫苗,但疫苗并不能阻止PCV2在豬群中的感染和傳播,現(xiàn)有商品化疫苗均為滅活疫苗,存在滅活疫苗常見(jiàn)不足。嵌合型PCV1-2活疫苗副作用小、只需要單劑量接種,相對(duì)而言更節(jié)省成本,并可克服滅活疫苗的不足。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的嵌合型PCV1-2活疫苗免疫商品豬,并對(duì)免疫豬進(jìn)行PCV2攻毒,通過(guò)對(duì)免疫攻毒豬進(jìn)行抗體、增重、病毒載量以及病理組織學(xué)研究,評(píng)價(jià)PCV1-2活疫苗對(duì)商品豬的免疫保護(hù)效力。1豬圓環(huán)病毒2型的分離鑒定于2017-2018年在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院和某規(guī)�；涝讏�(chǎng)(屠宰豬來(lái)自江蘇部分地區(qū))進(jìn)行采樣,以PCR方法檢測(cè)樣品中的PCV2 DNA,并對(duì)單純感染PCV2樣品處理后接種Dulac細(xì)胞進(jìn)行PCV2分離,得到11個(gè)PCV2分離株,并對(duì)其進(jìn)行全基因組序列測(cè)定。經(jīng)全基因組測(cè)序,11個(gè)PCV2分離株中,5株為PCV2b基因型,6株為PCV2d基因型,11個(gè)分離株的核苷酸序列同源性為96.7-99.9%。結(jié)果表明,PCV2b和PCV2d兩種基因型是目前江蘇地區(qū)PCV2毒株的流行基因型,為江蘇部分地區(qū)PCVAD的流行病學(xué)提供參考,同時(shí),為探索PCV2的進(jìn)化規(guī)律等提供了材料。2嵌合型PCV1-2活疫苗免疫持續(xù)期的初步研究應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的嵌合型PCV1-2活疫苗單倍劑量免疫商品豬,并以商品化滅活疫苗免疫組作對(duì)照,初步探討該活疫苗的免疫持續(xù)期。將14頭商品豬隨機(jī)分為四組,嵌合型PCV1-2活疫苗組和商品化滅活苗組各4頭豬。第一組試驗(yàn)豬頸部肌肉注射嵌合型PCV1-2活疫苗2×105.3 TCID50/頭;第二組試驗(yàn)豬頸部肌肉免疫商品化滅活疫苗2 ml/頭;第三組4頭豬不免疫作為攻毒對(duì)照組;第四組2頭豬為健康對(duì)照組,每周稱(chēng)重并采集各組試驗(yàn)豬血清檢測(cè)抗體。免疫后63天對(duì)除健康對(duì)照組外的所有試驗(yàn)豬攻毒PCV2,攻毒劑量為2×106.0TCID50/頭,每周稱(chēng)重并采集各組試驗(yàn)豬血清檢測(cè)抗體,攻毒后21天,撲殺所有試驗(yàn)豬,采集血清和組織臟器。結(jié)果表明:免疫組試驗(yàn)豬免疫后均可刺激機(jī)體產(chǎn)生較高水平血清熒光抗體和中和抗體,而活疫苗免疫組試驗(yàn)豬產(chǎn)生抗體時(shí)間更早,且抗體水平更高,維持高水平抗體時(shí)間更長(zhǎng)。熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),免疫組試驗(yàn)豬均可減輕PCV2病毒血癥、降低淋巴結(jié)及肺臟PCV2病毒載量。病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示,攻毒對(duì)照組試驗(yàn)豬肺臟及淋巴結(jié)等臟器出現(xiàn)明顯病變,而免疫組試驗(yàn)豬損傷輕微。由此可見(jiàn),PCV1-2活疫苗免疫后可對(duì)豬體產(chǎn)生免疫保護(hù),降低攻毒豬體內(nèi)PCV2病毒載量,減輕PCV2造成的病理?yè)p傷。疫苗免疫后至少2個(gè)月內(nèi)可提供高水平免疫保護(hù)。
【圖文】：

圖１－４間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果逡逑

圖１－２ＰＣＶ２全基因組ＰＣＲ擴(kuò)增逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋ＰＣＲ邋ｐｒｏｄｕｃｔ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＰＣＶ２邋ｆｏｒ邋ｃｏｍｐｌｅｔｅ邋ｇｅｎｏｍｉｃ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651;S858.28

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