【摘要】：水貂是重要的毛皮用經(jīng)濟(jì)動(dòng)物,目前以人工養(yǎng)殖為主。我國水貂養(yǎng)殖量居世界第一位,其中山東省的養(yǎng)殖量占全國70%以上。伴隨取皮后而產(chǎn)生的大量水貂胴體及其內(nèi)臟引起了國內(nèi)廣泛關(guān)注,它們作為副產(chǎn)品的開發(fā)較少。由于國內(nèi)外對(duì)水貂胴體成分尚缺乏科學(xué)的認(rèn)識(shí)和加工技術(shù),水貂胴體利用或處理十分混亂,它們有被養(yǎng)殖戶直接加工于飼料中用于其它毛皮動(dòng)物的喂養(yǎng),也有被加工成“野味食品”,也有被深埋或丟棄處理的,這給生態(tài)環(huán)境以及毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖帶來了相當(dāng)大的生物安全隱患。本研究旨在對(duì)取皮后水貂胴體及內(nèi)臟組織中主要病原菌大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌和金黃色葡萄球菌開展調(diào)查研究,為水貂胴體及內(nèi)臟組織生物安全評(píng)估和科學(xué)利用提供依據(jù)。首先根據(jù)大腸桿菌的phoA基因、沙門氏菌的invA基因、肺炎克雷伯氏菌khe基因和金黃色葡萄球菌的nuc基因的保守序列設(shè)計(jì)四對(duì)特異性引物,優(yōu)化反應(yīng)體系和退火溫度,建立檢測四種病原的多重PCR方法,對(duì)其特異性、敏感性和穩(wěn)定性進(jìn)行分析;收集山東省水貂主產(chǎn)區(qū)諸城、文登、聊城、日照、海陽等地區(qū)水貂胴體及內(nèi)臟樣品,對(duì)其四種病原菌開展檢測;對(duì)陽性樣品中病原菌進(jìn)行常規(guī)分離培養(yǎng)、生化鑒定。結(jié)果顯示,所研制的多重PCR方法能擴(kuò)增出四種病原菌的核酸片段大小分別為:622?bp(大腸桿菌)、801?bp(沙門氏菌)、303?bp(肺炎克雷伯氏菌)和464?bp(金黃色葡萄球菌),對(duì)貂源魏氏梭菌、綠膿桿菌和鏈球菌等無特異性擴(kuò)增;該方法對(duì)相應(yīng)四種病原菌的靈敏度分別為1.0?pg/μL、10.0 pg/μL、10.0?pg/μL和1.0 pg/μL,且結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性較好。用該方法對(duì)收集的268份水貂胴體及內(nèi)臟組織檢測發(fā)現(xiàn),四種致病菌的陽性檢出率為37.69%(101/268),其中大腸桿菌的檢出率為33.96%(91/268),肺炎克雷伯氏菌為2.61%(7/268),沙門氏菌為0.75%(2/268),金黃色葡萄球菌為0.37%(1/268),肺炎克雷伯氏菌和大腸桿菌雙重感染為2.61%(7/268)。陽性樣品中分離鑒定出83株大腸桿菌,2株沙門氏菌,7株肺炎克雷伯氏菌和1株金黃色葡萄球菌。以上結(jié)果表明,成功建立能夠特異檢測貂源大腸桿菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌和金黃色葡萄球菌的四重PCR方法;四種病原菌在取皮后水貂胴體及內(nèi)臟組織中存在不同程度的感染,其中大腸桿菌感染率最高。
【圖文】：

圖 1 單一 PCR 退火溫度的優(yōu)化Fig. 1 Amplification of single PCR under the condition of different annealing temperatureM, D2000 DNA maker；1, 52.0 ℃；2, 52.9 ℃；3, 53.8 ℃；4, 54.9 ℃；5, 56.0 ℃；6, 57.0 ℃；7, 58.1 ℃；8, 59.2 ℃；9,60.1 ℃；10, 61.0 ℃A.大腸桿菌；B.肺炎克雷伯氏菌；C.沙門氏菌；D.金黃色葡萄球菌；

圖 2 多重 PCR 退火溫度的優(yōu)化Fig. 2 Amplification of multiplex PCR under the condition of different annealing temperatureM, D2000 DNA maker；1, 52.0 ℃；2, 52.9 ℃；3, 53.8 ℃；4, 54.9 ℃；5, 56.0 ℃；6, 57.0 ℃；7, 58.1 8, 59.2 ℃；9, 60.1 ℃；10, 61.0 ℃
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S852.61

【參考文獻(xiàn)】

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1 賀冬梅;陳朝喜;尹遜慧;;水貂源大腸桿菌對(duì)9種抗菌藥物敏感性試驗(yàn)[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2015年05期

2 芮萍;馬增軍;楊彩然;逯春香;劉曜綜;藺紅海;;狐貉貂源致病性大腸桿菌的分離與鑒定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2015年05期

3 孫蓉蓉;鄒玲;劉文華;張燦;李文立;任慧英;;水貂大腸桿菌的分離·鑒定及藥敏試驗(yàn)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年11期

4 韓濤;亢文華;原霖;翟新驗(yàn);;動(dòng)物無害化處理與資源利用研究進(jìn)展[J];中國動(dòng)物檢疫;2015年02期

5 劉婧嫻;俞靜;劉瑛;;產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐藥基因及流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];中國感染與化療雜志;2015年01期

6 鐘世勛;遲珊珊;王振;姜曉東;朱福杰;王迪;張永兵;朱瑞良;;山東規(guī)�；B(yǎng)殖場毛皮動(dòng)物多重感染病原學(xué)分析[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2014年11期

7 馬澤芳;;美國水貂養(yǎng)殖業(yè)及其養(yǎng)殖技術(shù)[J];經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào);2015年01期

8 姚粲璨;Gregory Charles Gray;陸家海;;人獸共患病疫情防控新觀念[J];中國病毒病雜志;2014年03期

9 馬婧嘉;施春雷;李可;史賢明;;沙門氏菌耐藥譜及質(zhì)粒耐藥基因的篩查[J];中國食品學(xué)報(bào);2014年04期

10 徐振波;劉曉晨;李琳;李冰;;金黃色葡萄球菌腸毒素在食源性微生物中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代食品科技;2013年09期

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本文編號(hào)：2648111